载体介导的RNAi技术对HL-60细胞hTERT基因表达和细胞生长的影响

【作者】 高吉照； 薛天阳； 许伟；

【机构】 徐州医学院附属医院；

【摘要】 目的探讨由载体介导的靶向hTERT基因的RNAi技术对白血病HL-6细胞hTERT基因表达和细胞生长的影响。方法用已经构建好的表达针对hTERT基因siRNA的质粒载体经转染试剂RNAi-Mate转染HL-60细胞;以空质粒、转染试剂及空白组作对照,将转染后24h、72h、120h的细胞用RT-PCR检测细胞hTERT基因mRNA的表达,Western-blot检测细胞hTERT蛋白的表达,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT检测细胞增殖活性。结果 24h、72h、120h组hTERTmRNA表达水平低于各对照组(P<0.05),实验组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);质粒组、转染试剂组hTERTmRNA表达水平与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。24h、72h、120h实验组蛋白相对表达水平分别为0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08,质粒组、转染试剂组、空白对照组分别为0.75±0.11、0.76±0.15、0.73±0.14。实验组蛋白表达水平低于各对照组(P<0.05),实验组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);质粒组、转染试剂组hTERT蛋白质表达水平与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。24h、72h、120h实验组、质粒组、转染试剂组、空白对照组凋亡率分别为(11.95±3.61)%、(14.61±2.97)%、(12.82±3.01)%、(4.25±2.16)%、(5.09±1.97)%、(3.76±1.84)%。实验组凋亡率明显高于各对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);质粒组、转染试剂组细胞凋亡水平无明显改变(P>0.05 vs空白对照组)。三个实验组细胞增殖活性抑制率明显高于各对照组(P<0.05);三个实验组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);质粒组、转染试剂组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论载体介导的靶向hTERT基因的RNAi技术能在体外抑制HL-60细胞hTERT基因和蛋白的表达,增加细胞凋亡,抑制增殖。更多还原