芬戈莫德(FTY720)对高氧后少突胶质前体细胞损伤的保护作用及机制探讨

【作者】 侯新琳； IVO BENDIX；

【机构】 北京大学第一医院儿科； 杜伊斯堡埃森大学医院；

【摘要】 目的 FTY720是2010.09美国FDA批准上市治疗脑白质损害的口服药,是从冬虫夏草中提取成分Myriocin(ISP-I)后合成的。FTY720与细胞上的鞘氨醇-1-磷酸(S1P)受体结合,与细胞膜上G蛋白受体偶联,激活细胞内的信号通道,使白质再髓鞘化,减少神经胶质瘢痕形成。本文以少突胶质前体细胞(OPCs)为研究对象,制备高氧脑白质损害。拟解决1.FTY720对高氧后OPCs是否有保护作用。2.FTY720保护作用的可能机制是什么。方法 (1)FTY720对高氧后OPCs的保护作用以出生后1-2d(P1-P2)的新生SD大鼠为实验对象,进行原代OPCs的培养。随机分为FTY720组、阴性对照组及空白对照组。FTY组给予不同浓度FTY720 1000nM、100nM、50nM、10M 24h,阴性对照组用DMSO/HCI替代FTY720,空白对照组不给予药物。给药24h后,每组细胞均随机分为高氧(80%氧)24h及正常氧(21%氧)24h两个亚组。用流式细胞仪比较三组细胞坏死及凋亡有无差异,同时用LDH释放检测细胞坏死、DAPI及TUNEL双染细胞计数检测细胞凋亡;存活的OPCs 4～6d能进一步分化成为少突胶质细胞(OLGs),用免疫荧光染色方法比较两组细胞髓鞘化程度;用半定量PCR、Western-blot比较两组细胞凋亡、过氧化物损伤、髓鞘化相关基因及蛋白表达的差异。(2)FTY720对OPCs保护作用的机制探讨用半定量PCR比较高氧损伤后,S1P的表达有无差异。不同浓度FTY720治疗后,细胞坏死、凋亡有无差异,S1P的表达有无下调。结果 (1)FTY720对高氧后OPCs有保护作用,表现为细胞存活率提高,凋亡减少;分化发育成为OLGs后,免疫荧光染色髓鞘化增多,髓鞘化相关基因、蛋白表达增多。尤其以100nM FTY720为著。(2)高氧损害后,S1P1及S1P3表达明显增多,S1P5表达无差异。不同浓度FTY720(1000nM-10nM)治疗后,S1P1的表达均呈下调趋势,100nM FTY720 S1P1表达明显低于其他组。S1P3表达亦呈下调趋势,但差异无统计意义。结论 FTY720对高氧后OPCs有保护作用,100nM FTY720疗效优于其他浓度;FTY720的保护作用可能与S1P1的调节作用有关。更多还原