莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路影响的研究

【作者】 韩凤娟； 汤欣； 李威； 王龙； 蔡冬燕； 吴效科；

【机构】 黑龙江中医药大学附属第一医院；

【摘要】 目的:观察莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株体外生长的影响及对SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路基因表达的影响,探讨莪术醇治疗卵巢癌的分子机制。方法:实时荧光定量-PCR法检测mRNA:根据MTT检测结果,选用莪术醇25、50、100μg/mL组做实时荧光定量-PCR实验,各组细胞培养48h后,利用Trizo]提取细胞总RNA,紫外分光光度仪检测RNA的含量及纯度。取总RNA 3μg进行逆转录反应,目的基因JAK2的上游引物序列:5′-GGGTGTTCGCGTCGCCACTT-3′,下游引物序列:5′-CAGATCGGGCGACCAGAGCG-3′,扩增片段为277bp。基因STAT3的上游引物序列:5′-GCGGCAGTTTCTGGCCCCTT-3′,下游引物序列:5′-CGGGCCACAATCCGGGCAAT-3′,扩增片段为231bp。内参β-actin的上游引物序列:5′-GAGCCTCGCCTTTGCCGATCC-3′,下游引物序列:5′-CGATGCCGTGCTCGATGGGG-3′,扩增片段为278bp。20μ1反应体系PCR扩增(10μ1 Premix Ex TaqTM,0.2μlforward Primer,0.2μl reverse Primer,0.2μ1 Probe,8.4μlH20,1μ1 cDNAtemplate):94℃预变性1 min,94℃20s,6℃40s,40个循环。不同浓度莪术醇作用于人卵巢癌细胞株SKOV3,MTT法检测SKOV3细胞的增殖抑制率,实时荧光定量-PCR法检测SKOV3细胞中JAK2、STAT3基因表达水平。结果:莪术醇对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制作用,其强度随药物作用时间及浓度的增加而增强,呈时间-剂量依赖性。实时荧光定量-PCR法检测证实莪术醇作用后SKOV3细胞中JAK2、STAT3基因表达受到明显抑制。结论:莪术醇能明显抑制SKOV3细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过降调节JAK2、STAT3基因的表达来实现的。在卵巢癌细胞体外研究中均表达为STAT3(p-STAT3)的高磷酸化,而在正常的卵巢上皮细胞株和良性卵巢肿瘤细胞株中,并不存在高磷酸化的STAT3。本研究通过MTT实验我们看出,莪术醇对SKOV3细胞体外生长具有明显的增殖抑制作用,且抑制作用随时间、浓度的增加而不断加强,其抗增殖效应呈时间-剂量效应关系。实时荧光定量-PCR结果表明,药物作用后SKOV3细胞中JAK2和STAT3 mRNA的表达均下调,且随莪术醇浓度的增加其表达呈下降趋势,说明莪术醇抑制卵巢癌细胞增殖、促进其凋亡的机制与JAK2/STAT3的激活受抑制、基因表达下调有关。本研究显示莪术醇作用于SKOV3细胞后,可特异性地抑制酪氨酸激酶的活性,从基因水平抑制STAT3的表达,抑制STAT3的磷酸化,进而阻滞了卵巢癌细胞中异常活跃的信号转导通路,抑制卵巢癌细胞的增殖,起到抗肿瘤的作用。为临床上选用有效的抗肿瘤药物提供较充分的理论依据。本实验确定了莪术醇对卵巢癌的增殖抑制及JAK2/STAT3信号通路的作用,针对莪术作用于以STAT为分子靶点的肿瘤治疗也将逐渐成为研究热点。另外莪术醇抑制卵巢癌增殖是否还有其它信号途径的参与,以及这些信号通路与JAK2/STAT3信号通路的相关性尚不清楚,其是否通过多靶点抑制卵巢癌尚待进一步研究。更多还原