黑麦B染色体特异序列的筛选及FISH定位

【作者】 赵换； 陈成彬； 王春国； 宋文芹；

【机构】 南开大学生命科学学院；

【摘要】 本研究以0B/+B黑麦为材料,利用染色体微切技术分离了黑麦B染色体,经两轮LA-PCR扩增,构建了单条B染色体DNA文库,扩增片段大小为200 bp-2000 bp,文库的大小约为3.0×10~4。经Southern杂交、染色体荧光原位杂交证明这些片段来自黑麦基因组。文库中66.7%为高拷贝序列:利用荧光原位杂交技术对文库中的克隆进行了定位,首次获得11个B染色体特异序列,其中9个序列分布于B染色体长臂末端,是新发现的B染色体长臂特有序列。另外2个是B染色体短臂特异序列,定位于黑麦B染色体短臂靠近着丝粒位置。首次筛选获得5个A、B染色体共有着丝粒特异序列,但B染色体着丝粒部位的杂交信号明显比相应A染色体强和大,暗示在黑麦B染色体着丝粒部位可能具有更高的拷贝数。从文库中筛选获得10个中、高度重复序列,这些序列均被成功定位在黑麦B染色体和A染色体上,除个别染色体外,各探针基本弥散分布于整个基因组中,初步分析都为A、B染色体共有中、高度重复序列,但它们之间所显示的杂交信号有很大的区别,在B染色体和A染色体之间信号也存在一些差异,说明在A、B染色体上这些序列结构、重复程度有所不同。上述发现的这些序列为构建为人工B染色体载体提供了重要的可利用的序列。更多还原