细粒棘球蚴原头蚴-成虫(PSC-AW)和原头蚴-成囊(PSC-CW)抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及生物信息学分析

【作者】 赵莉； 张壮志； 石保新； 张旭； 古努尔·吐尔逊； 米晓云； 吐尔洪·依米提； 王进成； 马正海； 巫剑； 张文宝； 李国庆；

【机构】 新疆大学生命科学与技术学院； 新疆维吾尔自治区畜牧科学院兽医研究所； 新疆阿勒泰市切木尔切克乡兽医站；

【摘要】 目的:细粒棘球绦虫原头蚴具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴成囊和成虫特异性的基因。方法将SC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3 sequence assembly在线软件、Blast2GO软件与GenBank数据库对序列进行分析,筛选原头蚴成囊和成虫特异性的基因,并探讨这些基因的功能。结果PSC-CW和PSC-AW文库扩增后分别得到280和200个阳性克隆,菌落PCR分析,这些克隆均插入200～1000bp片段。测序结果显示PSC-CW和PSC-AW SSH文库分别得到16和10个特异性基因。其中PSC-CW SSH文库中得到4个高表达基因,12个单一基因,其中5个为未知基因,已知基因为细胞色素c氧化酶Ⅰ、热休克蛋白70和铁蛋白等功能蛋白。PSC-AW SSH文库中得到2个高表达基因,8个单一基因,其中4个为未知基因,其中已知基因为基质蛋白1、延伸因子1α和脂肪酸结合蛋白等功能蛋白。结论筛选获得原头蚴成囊和成虫发育时差异表达的基因,对这些基因的功能进行分析表明,PSC-CW SSH文库中多是与营养和能量转运相关的功能基因,而PSC-AW SSH文库中多为发育与分化相关的基因,这些基因的差异表达可能与原头蚴处于不同的生长环境和发育方向有关,同时也为棘球蚴病免疫诊断、药物筛选和疫苗研制提供候选基因。更多还原