基于两个假定蛋白基因位点的柑橘黄龙病病原菌种群分化研究

【作者】 王雪峰； 苏华楠； 柏自琴； Jianchi Chen； 周常勇；

【机构】 中国农业科学院柑桔研究所； 西南大学柑桔研究所； United States Department of Agriculture-Agricultural Research Service；

【摘要】 柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）是世界柑橘生产上最具毁灭性的病害之一,能侵染几乎所有柑橘类植物,造成植株经济寿命减短,产量降低,果品质劣经济价值降低,从而引起巨大的经济损失。目前,国际上普遍认为韧皮部杆菌属的3个暂定种:亚洲种（Candidatus Liberibacter asiaticus）、非洲种（Ca.L.africanus）和美洲种（Ca.L.americanus）为该病的病原,中国的黄龙病病原菌为亚洲种。本研究从已公布的黄龙病亚洲种Psy62株系基因组中选择65个基因组位点设计引物,对5个中国广东株系和5个中国云南株系进行PCR平行分析,从中筛选到两个具有扩增多态性的假定蛋白基因位点（CLIBASIA₀5532和CLIBASIA₀5620）,并以这两个位点为分子标记对中国Ca.L.asiaticus种群分化进行评估。应用引物Lap5532f/Lap5532r和Lap5620f/Lap5620r,对来源于中国南方9个省（自治区、直辖市）柑橘产区的245份感病样品（经OI1/OI2C引物鉴定确认所有样品均为阳性）进行PCR鉴定,结果表明应用Lap5620f/Lap5620r扩增时所有云南、贵州和四川样品均为阳性,其他省份样品检测阳性率从0%至37.5%;而应用引物Lap5532f/Lap5532r扩增时结果几乎与Lap5620f/Lap5620r引物对扩增结果相反,所有云南、贵州和四川样品检测阳性率仅从0%至10%,而除浙江（0%）和江西（25%）外,其他省份检测率为50%～89.6%。方差分析显示这两个基因位点检测频率上,西南地区（云、贵、川）样品和其他地区样品存在显著差异。本研究通过常规PCR手段扩增‘Ca.L.asiaticus’两个基因组位点,首次发现中国种群内高海拔（云贵高原）和低海拔地区‘Ca.L.asiaticus’存在明显种群分化,并据此初步提出中国柑橘黄龙病多中心起源的假说。该研究方法在不同国家（地区）黄龙病起源、流行学研究上有潜在应用价值。更多还原