p27kipl和Skp2与周围神经损伤和再生的相关性研究

【作者】 史淑贤； 沈爱国；

【机构】 南通大学江苏省神经再生重点实验室； 南通大学基础医学院微生物与免疫学教研室；

【摘要】 周围神经损伤是指因某些因素造成神经传导功能障碍、神经轴索中断或神经断裂,导致躯干和四肢感觉、运动、交感功能障碍的一类临床病症,它严重影响患者的劳动力和生活质量。损伤后的再生修复问题一直是创伤外科和神经科学关注的重点之一。周围神经损伤后,损伤平面远段的神经纤维全长以及近段发生长度不等的髓鞘和轴突崩解破坏,即华勒氏变性。随后损伤近段的轴突出芽、延伸,长入远端雪旺氏细胞索,使再生轴突再髓鞘化,从而与相应的靶器官再次建立联系。此外,与受损周围神经相对应的中枢神经系统也会发生损伤和再生。组织的修复、再生离不开细胞的增殖,那么此过程必然涉及到细胞周期调节蛋白的作用。p27kip1是细胞周期蛋白负性调控分子的典型代表,它通过与Cyclin/CDK2形成复合物抑制其活性,从而调节细胞周期进展。p27kip1的降解对其功能发挥的调节非常重要,主要通过S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associ-ated protein 2,Skp2)介导的细胞周期依赖性、底物特异性的泛素/蛋白酶体途径。已有研究发现,p27kip1与神经系统的发育密切相关。神经再生的过程类似于发育,那么p27kip1在神经损伤后表达有什么变化?假如存在表达变化,此变化是否由Skp2的蛋白降解作用所引起?它们对神经再生有什么意义?本课题即结合组织水平和细胞水平的研究,来对上面的问题进行深入、全面的回答。首先,在组织水平上,根据损伤程度的不同,我们分别建立了坐骨神经夹伤和切断两种模型,然后观察p27kip1和Skp2在损伤前后坐骨神经及相应的背根神经结、脊髓中的表达变化。Western blot结果显示,p27kip1蛋白水平在损伤后组织中有不同程度降低,Skp2变化与其相反。免疫组化进一步证实了Western的结果。免疫共沉淀及免疫荧光双标证明p27kip1和Skp2在这些组织中都存在相互作用。此外,还用免疫荧光双标对它们进行亚细胞定位。在以上组织水平研究结果的基础之上,我们又深入到细胞水平。在这一部分,我们将应用RNA干扰、质膜分离等新的技术来观察和探讨p27kip1和Skp2及其相关信号通路对这些神经损伤、修复相关的细胞功能的影响。本课题将对p27kip1和Skp2的研究由肿瘤领域扩展到神经再生领域,是神经生物学的一项创新性研究。既丰富了人们对神经损伤和再生机制的认识,又加深了对这两个分子功能的了解。研究结果或许能为神经损伤后再生提供新的研究和治疗思路。更多还原