转移相关基因Tiam1启动子高甲基化抑制结直肠癌细胞生长与侵袭

【作者】 林洁； 李婷婷； 王博； 金贺； 丁彦青；

【机构】 南方医科大学基础医学院病理学系； 南方医科大学南方医院病理科；

【摘要】 目的:我们前期的研究显示,Tiam1是结直肠癌转移相关基因,其在结直肠癌中表达上调与其启动子低甲基化有关,在本研究中,我们进一步探索逆转Tiam1基因启动子的低甲基化状态对结直肠癌细胞生长、增殖、侵袭和迁移能力的影响,以期为结直肠癌转移的防治提供新的靶点和可能的治疗途径。方法 :体外扩增Tiam1基因启动子序列并采用DNA甲基转移酶使Tiam1基因的启动子序列发生高甲基化改变,采用双荧光素酶报告基因系统检测处理前后启动子的活性。分别构建Tiam1高甲基化启动子-Tiam1mRNA载体与Tiam1未甲基化启动子-Tiam1mRNA载体,将之分别转染入结直肠癌细胞系HT29、LS174T及SW480中。采用WesternBlot法检测转染不同甲基化状态的Tiam1启动子后结直肠癌细胞株中Tiam1蛋白的表达。分别采用MTT实验、平板克隆形成实验及Transwe11小室侵袭实验观察转染不同甲基化状态的Tiam1启动子后结直肠癌细胞的生长、增殖及侵袭和迁移能力的改变。结果 :转染Tiam1高甲基化启动子的3株结直肠癌细胞中Tiam1蛋白表达明显下调,与转染未甲基化启动子的细胞株及转染空载体的细胞株相比,差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者之间Tiam1蛋白的表达无显著差异(P>0.05)。转染Tiam1高甲基化启动子的3株结直肠癌细胞的生长能力、平板克隆形成能力及侵袭与迁移能力均显著低于转染Tiam1未甲基化启动子的结直肠癌细胞(P<0.05),而转染Tiam1未甲基化启动子的结肠癌细胞与转染空载体的结直肠细胞在生长增殖、平板克隆形成及侵袭与迁移能力方面无显著差异(P>0.05)。结论、:高甲基化Tiam1基因启动子序列具有下调Tiam1蛋白表达的作用,并引起结直肠癌细胞生长抑制、克隆形成能力降低,并抑制结直肠癌细胞的侵袭与迁移能力。因此,逆转Tiam1基因启动子区域的低甲基化状态有望成为防治结直肠癌发生与转移的重要途径之一。更多还原