【作者】 樊守艳； 梁平； 张晓燕；

【Author】 Fan Shouyan 1 LiangPing 1 ZhangXiaoyan 2 (1. Hainan Medical University,Haikou,post code571101 2.Peking University Health Science Center,Beijing,post code100191)

【机构】 海南医学院； 北京大学医学部；

【摘要】 目的:构建并鉴定小鼠FAM3C人的重组腺病毒pAd-FAM3C表达载体,为进一步研究FAM3C功能奠定基础。方法:分离正常小鼠肝脏、脾脏,提取总RNA,逆转录为cDNA,PCR扩增FAM3C基因,将其克隆到T3载体上,再含有绿色荧光蛋白(GFP)标记的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV后,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体pAdTrack-CMV-pEASY-T3-FAM3C,转染HEK293T细胞包装病毒。荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光,测定病毒效价,Westernblot分别分析细胞内FAM3C蛋白质的表达。结果:经双酶切及基因鉴定,重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒均见约700bp插入片段,测序结果和GenBank中的基因序列一致。重组病毒效价为2.8×108pfu/mL;重组病毒感染后,HEK293T细胞中有FAM3C蛋白质有表达。结论:成功构建FAM3C重组腺病毒载体,并可在HEK293T细胞中表达,为进一步研究FAM3C的功能奠定了基础。更多还原