大口黑鲈溃疡综合症病毒MCP基因序列分析及PCR快速检测方法的建立

【作者】 马冬梅； 白俊杰； 邓国成； 李胜杰； 叶星； 江小燕；

【机构】 中国水产科学研究院珠江水产研究所中国水产科学研究院热带亚热带鱼类选育与养殖重点开放实验室；

【摘要】 为了早期快速诊断近年来流行于广东省养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides)中的病毒性溃疡综合症,本研究用基因组步移的方法获得了大口黑鲈溃疡综合症病毒(Largemouth bassulcerative syndrome virus,LBUSV)主要衣壳蛋白(MCP)基因,该基因编码区全长1392bp。通过序列比较分析,在MCP基因内确定了一段241bp的特异性较强的片段作为靶序列,设计并合成引物,经过优化PCR反应条件,建立了可以快速检测大口黑鲈溃疡综合症病毒的PCR方法。实验表明,在PCR进行到30个循环反应时可以检测到的质粒最小浓度是10~4拷贝数/μL,相当于10~4个病毒粒子。利用该方法,从天然感染LBUSV的大口黑鲈脾脏组织DNA可扩增出241bp的片段,而健康大口黑鲈和感染了传染性脾肾坏死病毒样病毒的大口黑鲈脾脏组织则没有扩增条带。本研究建立的PCR检测方法具有检测快速、成本低、准确性高的特点,适用于大范围推广应用。更多还原