冬季东乡野生稻C3HC4型环锌指蛋白基因鉴定与原核表达

【作者】 陈发远； 曹博洋； 罗茜； 王义华；

【机构】 江西农业大学理学院；

【摘要】 东乡野生稻是目前世界上分布最北的唯一能越冬的普通野生稻,蕴含着丰富的优良种质资源,如抗冷,抗病、抗虫等。这些性状或由单基因,或由多基因协同控制,因此挖掘并鉴定优质性状基因具有重要的意义。本研究从东乡野生稻宿根cDNA文库中筛选鉴定一个编码C3HC4型环锌指蛋白基因,ORF全长为705bp,与普通水稻的同源度达到99%。生物信息学分析显示,该蛋白以极性氨基酸残基为主,含有一个跨膜区域和一个参与调控蛋白间相互作用的环锌指结构域。对该基因上游启动子序列的分析表明,启动子序列含有ABRELATERD1,CBFHV,MYB1AT等顺式元件,推测该基因的表达受ABA,干旱诱导调控。构建该锌指蛋白基因的pET28(a+)的重组载体,转入大肠杆菌BL21,经IPTP诱导表达蛋白,SDS-PAGE电泳检测可知表达蛋白以包涵体形式存在,分子量约29.5kD,与预期蛋白大小相符;利用Ni-NTA Superflow层析柱纯化蛋白,蛋白纯化效果良好。本研究为深入探讨野生稻C3HC4型环锌指蛋白功能的鉴定奠定了良好的基础。更多还原