大肠杆菌谷胱甘肽转运蛋白的研究

【作者】 王中山； 向泉桔； 王广珺； 王海燕； 张义正；

【机构】 四川大学生命科学学院四川省分子生物学及生物技术重点实验室；

【摘要】 大肠杆菌中存在一种新发现的谷胱甘肽转运系统,由gsiA,-B,-C,和-D等4个基因编码,隶属于ATP-binding cassette(ABC)转运蛋白家族,可利用ATP水解所产生的能量移动底物分子跨过细胞膜。其中,gsiA和-B分别编码ATP结合蛋白和细胞周质底物结合蛋白;gsiC和-D编码内膜蛋白,它们都含有6个预测的跨膜区和多个保守元件,其C-端定位于细胞质内。为了研究大肠杆菌谷胱甘肽转运系统转运3肽的机制,首先利用PCR和SLIC方法(Sequence and ligation-independent cloning)克隆了上述4个基因并将它们插入到含有GFP标签的pWaldo-GFP载体中,然后将重组质粒转入大肠杆菌进行表达,现已获得能够大量表达GsiA,GsiB和膜蛋白GsiC的表达菌株,并且优化了每一个基因的表达条件:三个基因分别在Rosetta(DE3),BL21(DE3)和C43(DE3)菌株中,在用0.1mmol/LIPTG 18℃诱导时表达最佳,可得到大量可溶性蛋白质;膜蛋白GsiD也得到表达,但表达量仍需进一步提高。最后是分别将上述4个基因插入到相互作用载体pET11a-link-NGFP和pMRBAD-link-CGFP中,构建了蛋白质相互作用的重组子载体,通过细菌双杂交的方法,获得的初步研究结果显示,两个膜蛋白GsiC和GsiD之间,以及两者与GsiA之间可能存在相互作用的关系。上述研究结果为研究谷胱甘肽转运机制奠定了很好的基础。更多还原