血清性促性腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

【作者】 张京； 马春艳； 李焕； 周忠岭； 陈萸芳；

【机构】 天津实验动物中心；

【摘要】 本项目研究的目的是采用国产eCG/PMSG精提品,观察其亚基的解离效果,并对其β亚基特异性单克隆抗体进行了制备、鉴定及免疫学研究。方法:采用孕马原血浆制品经色谱法精提后,用尿素解离得到β亚基,取全分子及β做为抗原,制备得到抗eCG/PMSGβ单克隆抗体,采集腹水用ConA进行纯化。结果:杂交瘤细胞系克隆共获得8株杂交瘤细胞。其中5株为IgG1,3株为IgGM;SDS-PAGE电泳:α亚基分子量为20 kDa,β为45 kDa;Western blot分析,其中4株识别抗原;交叉反应试验:细胞上清只同PMSG发生特异性结合,与FSH、LH、Hcg不反应;亲和力测定结果:为8.2×10⁸-6.64×10¹⁰;纯化的腹水抗体效价在1:196830-1:1771470之间。讨论:eCG/PMSG是蛋白质异二聚体,含有非共价键连接的,高度糖基化的两个亚单位,经解离后可分别获得α和β亚基。将β亚基制成单克隆抗体,用高纯度eCG/PMSG为包被抗原与多抗、单抗均呈特异性抗原、抗体反应,且OD值较高。说明eCG/PMSG抗体与相应抗原决定簇有强亲和力,这为研究其结构与生物活性,以及通过亲和反应达到高度纯化eCG/PMSG均是可行的。尤其是单抗可作为有力的位点探针用于检查eCG/PMSG的分子结构、免疫组化的探讨,以决定其功能位置,亦可以为孕马原血浆中eCG/PMSG快速测定方法的建立打下基础。更多还原