利用人乳铁蛋白BAC骨架高效表达人溶菌酶基因

【作者】 刘燊； 鲁丹； 商圣哲； 李秋艳； 李宁；

【机构】 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室；

【摘要】 传统转基因的方法由于受DNA克隆载体容量的限制,随机整入的外源基因片段通常较小(<25kb),某些重要的原件,如增强子,绝缘子,座位控制区和激素结合位点等,都有可能丢失。细菌人工染色体(BAC)通常大于100kb,能包含很长的目的基因上下游的侧翼序列,基本消除了基因整入后的"位置效应",使外源基因的表达更接近于体内水平。我们实验室将人乳铁蛋白(hLF)BAC转入牛成纤维细胞中,通过核移植,成功获得了乳腺特异表达人乳铁蛋白(hLF)的转基因牛,表达量高达2.5 g/L,该研究提示hLF BAC可以作为一个乳腺特异表达的载体,但是传统的方法无法对BAC进行改造。为了在乳腺高效表达人溶菌酶(hLYZ)基因,我们引入了λ噬菌体重组技术,成功实现了人乳铁蛋白基因到人溶菌酶基因的替换,构建了人乳铁蛋白骨架—人溶菌酶基因杂合的BAC。该载体的研制方法可以为国内从事转基因工作的人员提供参考。更多还原