CYP2J3基因转染对缺氧后处理大鼠心肌线粒体的影响

【作者】 芦玲巧； 王红霞； 曾翔俊； 张冬梅； 沈海中； 张立克；

【机构】 首都医科大学病理生理学教研室；

【摘要】 目的通过复制心肌原代乳鼠心肌细胞H/R损伤和HPO模型,观察CYP2J3基因转染后H/R心肌细胞后缺氧后处理心肌细胞线粒体功能的改变,证实CYP2J3/EETs系统通过影响线粒体而介导缺氧后处置心脏保护作用。方法采用消化贴壁法分离乳鼠原代心肌细胞,采用缺氧3h,复氧2h方法复制心肌细胞H/R模型。随机分为五组:对照组(CON)、模型组(H/R)、缺氧后处理组(HPO)、CYP2J3基因转染组(CYP2J3)、H/R+CYP2J3基因转染组(H/R+CYP2J3)。采用MTT检测心肌细胞存活率;采用RT-PCR检测CYP2J3 mRNA的水平,采用Western-Blot检测CYP2J3蛋白的表达水平,采用高效液相色谱方法(high pressure liquid chromatography,HPLC)检测心肌培养液11,12-环二十碳三烯酸(11,12-Epoxyeicosatrienoic Acid,11,12-EET)水平;采用酯化钙黄绿素(Calcein-AM)和氯化钴(CoCl2)共孵育的方法检测MPTP开放情况,采用线粒体膜电位探针5,5’6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazol-carbocyanineiodide(JC-1)染色检测线粒体膜电位。结果①与H/R组比较,HPO组和H/R+2J3组心肌细胞存活率明显增加(P<0.01),而H/R+CYP2J3组削弱了HPO对心肌的保护作用。单纯的CYP2J3基因转染心肌细胞的存活率与CON组无明显影响。②与H/R相比,HPO组和H/R+CYP2J3基因转染组上调CYP2J3mRNA、CYP2J3蛋白及11,12-EET含量水平,CYP2J3基因转染组与CON组无明显影响。③与H/R相比,HPO组和H/R+2J3线粒体膜电位去极化程度明显降低(P<0.01),mPTP开放程度也明显下降(P<0.01)。结论 HPO拮抗心肌缺氧/复氧损伤作用与其上调CYP2J3/EETs系统进而影响线粒体mPTP开放程度及线粒体膜电位去极化有关。更多还原