HIV-1 LTR在精子和早期胚胎中甲基化状态

【作者】 李方正； 黄天华； 康祥锦； 谢庆东；

【机构】 汕头大学医学院生殖医学研究中心； 青岛农业大学动物科技学院；

【摘要】 背景和目的:已有研究证实,艾滋病病毒(HIV)基因能够整合到人精子染色体中,精子带入受精卵的HIV基因能够在早期胚胎细胞中复制与表达。DNA甲基化是表观遗传学修饰的一个重要内容,在早期胚胎发育中起重要的调节作用。也是细胞调控宿主基因表达和进入细胞内的病毒基因表达的重要方式。本研究构建重组质粒pIRES2-EGFP-LTR-gag,将其转染人精子,与金黄地鼠去透明带卵母细胞受精后,检测精子中整合HIV-1 LTR、单细胞胚以及二细胞胚中的HIV-1 LTR的甲基化状态,以及HIV-1 gag基因在早期胚胎细胞中的复制和表达,为HIV-1的转录调控提供证据。材料和方法:1.pIRES2-EGFP-LTR-gag质粒构建,采用HIV-1 LTR替换pIRES2-EGFP中的CMV启动子。2.人精子与金黄地鼠去透明带卵母细胞异种体外受精,获取受精卵和2-细胞胚胎;3.提取精子、受精卵和二细胞胚的DNA;4.亚硫酸氢盐修饰DNA;Nested PCR扩增片段,连接T载体,测序。结果:(1)pIRES2-EGFP-LTR-gag质粒经鉴定构建成功,能够表达绿色荧光蛋白;(2)人精子与金黄地鼠去透明带卵母细胞异种体外受精,成功地获取了用于实验的受精卵和2-细胞胚胎;(2)提取精子、受精卵和2-细胞胚胎DNA,用亚硫酸氢盐修饰后成功获得了扩增片段;(3)HIV的LTR调控区域转录因子结合位点在受精过程中发生去甲基化现象。更多还原