一种大熊猫亲子鉴定试剂盒的研制

【作者】 沈富军； 张志和； 侯蓉； 杨建东； 张亮； 张文平； 岳碧松；

【机构】 成都大熊猫繁育研究基地； 四川省濒危野生动物保护生物学重点实验室； 四川农业大学； 四川大学生命科学学院；

【摘要】 对2001年~2010年来获得的大熊猫微卫星分型数据进行整理、合并、筛选和重复实验,获得了11个具有高度多态性的微卫星标记,并在此基础上建立了个体数达121只的大熊猫微卫星数据库。通过大规模克隆、测序,获得这11个大熊猫微卫星基因座各等位基因的一级结构,并制备成相应的质粒。按照ISFG等位基因命名法则对这些等位基因进行甄别和命名。然后用ROX荧光标记的引物对这些质粒做PCR扩增,制备各基因座的等位基因梯度(Ladder)。最后以这些等位基因为分型标准物,优选各基因座PCR过程中的退火温度和镁离子浓度等参数,制备大熊猫亲子鉴定试剂盒。结果共获得各基因座等位基因单倍型产物82个,成功制备质粒68个。获得各等位基因的荧光标记产物。并将这些产物均匀混合,制备成等位基因梯度标准物。分型标准物与各基因座的等位基因之间存在明确的一一对应关系,可以非常准确地进行微卫星分型。该大熊猫微卫星分型标准物可以有效用于大熊猫的个体识别、亲子鉴定和遗传多样性研究。更多还原