一株人源灭活轮状病毒疫苗研制用毒株的分离和免疫学效果评价

【作者】 吴晋元； 李鸿钧； 贾琴妹； 易山； 张光明； 谢天宏； 郜岩； 杨星； 赵晓南； 孙茂盛；

【机构】 中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室； 昆明医学院；

【摘要】 目的评价一株人源性轮状病毒毒株的生物学,免疫学特性及用于轮状病毒疫苗制备的开发可行性。方法经细胞培养,分离到轮状病毒毒株ZTR-5株,并在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫荧光定量检测病毒的感染性滴度,对收获的病毒液进行离心、超滤、抗原纯化,甲醛灭活,抗原定量检测Al（OH）₃吸附制备的实验性疫苗。使用不同剂量（8EU、32EU、128EU、256EU）经肌内注射免疫小鼠,免疫三次,间隔2周。采用间接ELISA法检测血清特异性抗体效价。结果通过分离及蚀斑纯化,筛选得到一株纯化的病毒株ZTR-5,在Vero细胞上适应性后感染性滴度达7.35log CCID₅₀/ml;大量培养收获的病毒原液滴度为7.57logCCID₅₀/ml,制备获得轮状病毒样品抗原含量为2560EU/ml;经肌内注射,初次免疫后,所有剂量组动物均获得抗体阳转,阳转率为100%;第一次加强免疫后,各组血清特异性抗体水平均明显增高,免疫剂量为128EU和256EU的两组小鼠血清抗体效价均达1:10240;第二次加强免疫后,各剂量组血清抗体效价依次达1:5120,1:7456,1:14481.54,1:14481.54。结论获得一株人源轮状病毒野生型毒株ZTR-5株,该毒株有良好的细胞适应性,可在Vero细胞上稳定,高滴度复制增殖,所制备的疫苗具良好免疫原性。更多还原