人肝细胞生长因子慢病毒载体的构建及其在成肌细胞中的表达

【作者】 苏冠华； 刘启云； 卢永昕； 孙雨霏； 帅欣欣； 刘晓明；

【机构】 华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科； 武汉市第四医院心内科；

【摘要】 <正>目的构建能表达重组人肝细胞生长因子(rhHGF)基因的第三代慢病毒载体,实现人肝细胞生长因子基因在犬骨骼肌成肌细胞中长期和稳定的表达。方法(1)将目的基因hHGF亚克隆到pRNAT-U6.2慢病毒载体上,构建重组载体pRNAT-U6.2-hHGF,并通过限制性内切酶酶切电泳、菌落PCR和基因测序进行鉴定。(2)体外培养原代犬骨骼肌成肌细胞,通过免疫细胞化学鉴定纯度,台盼兰染色检测细胞活性,MTT法观察生长曲线;(3)将pRNAT-U6.2-hHGF及阳性对照质粒更多还原