c-Met siRNA对肝细胞生长因子诱导的人胆管癌QBC939细胞增殖的影响

【作者】 张秀华； 缪林； 季国忠； 范志宁； 刘政；

【机构】 南京医科大学第二附属医院消化医学中心,南京医科大学消化内镜研究所；

【摘要】 目的探讨针对肝细胞生长因子(HGF)受体c-Met的RNA干扰对人胆管癌QBC939细胞增殖的影响。方法构建针对人c-Met基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的人胆管癌QBC939细胞,应用MTT法检测细胞增殖,Western Blot检测c-Met、细胞周期素(Cyclin)D1和Cyclin A表达以及磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路活化。结果 c-Met siRNA显著抑制c-Met蛋白表达,且随着c-Met siRNA浓度的增加,c-Met蛋白表达逐渐下降,500 nM c-Met siRNA对c-Met蛋白表达的抑制率达到65%。HGF刺激24 h,细胞增殖是对照组的4.54倍,100 nM c-Met siRNA预处理即显著抑制HGF诱导的细胞增殖,其抑制率达到26%,且随着浓度增加,其抑制作用逐渐增强,500 nMc-Met siRNA对HGF诱导的细胞增殖的抑制率达到85%。HGF刺激4 h,PI3K和Akt的活性即显著增强,分别是对照组的4.09和4.54倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的PI3K/Akt活化,500 nMc-MetsiRNA几乎完全抑制HGF诱导的PI3K/Akt活化。HGF显著诱导人胆管癌QBC939细胞ERK1/2活化,50 ng/mlHGF刺激4 h,磷酸化ERK1/2表达是对照组的3.63倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的ERK1/2活化。HGF显著诱导人胆管癌QBC939细胞Cyclin D1和Cyclin A表达,分别是对照组的2.83和3.16倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的Cyclin D1和Cyclin A表达。结论针对人c-Met基因的RNA干扰可以有效阻断人胆管癌QBC939细胞c-Met表达,并通过阻断PI3K/Akt和ERK1/2信号通路活化而抑制HGF诱导的细胞增殖更多还原