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E.coli LTb与PRRSV gp5融合基因原核表达及小鼠免疫效果研究

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【作者】 袁秀芳； 刘焕； 王一成； 徐丽华； 张存；

【机构】 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所；

【摘要】 采用PCR重叠延伸技术将LTb和PRRSV ORF5基因通过柔性连接进行融合后,克隆入原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-LTb-gp5,将重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,并用诱导剂IPTG进行诱导表达,经15%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的蛋白大小为26KD.经WesternBlotting分析,表达蛋白均能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应.为了比较猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的原核表达蛋白gp5蛋白及融合表达的LTb-gp5蛋白的免疫效果.将表达产物gp5蛋白及融合表达的LTb-gp5蛋白免疫6-8周龄ICR小鼠,并设对照组,用间接ELISA法和MTT法检测小鼠血清中特异性抗体水平以及脾脏中T,B淋巴细胞增殖功能.结果gp5蛋白以肌肉注射途径免疫效果较好;三免后抗体达到较高水平,其中LTb-gp5 IM与gp5乳化组之间差异不显著,而这两组与gp5 IM差异显著;LTb-gp5 IM、gp5乳化组和gp5 IM均能够诱导脾脏T,B淋巴细胞增殖.

【关键词】 LTb； PRRSV； gp5； 克隆表达； 免疫；
  • 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（上册）
  • 【会议名称】中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会
  • 【会议时间】2009-09-01
  • 【会议地点】中国广西南宁
  • 【分类号】S858.28
  • 【主办单位】中国畜牧兽医学会动物传染病学分会(Branch of Animal Infectious Diseases,CAAV)
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