多重PCR检测三种食源性寄生虫方法的建立

【作者】 杨朋欣； 张子群； 唐颖； 路义鑫； 宋铭忻；

【机构】 东北农业大学动物医学学院； 黑龙江出入境检验检疫局；

【摘要】 本研究旨在建立检测三种食源性寄生虫病病原的多重PCR方法。以旋毛型线虫(Trichinella spiralis)核糖体18S基因、华枝睾吸虫(Clonorchi sinensis)核糖体ITS1基因以及弓形虫(Toxoplasma gondii)的B1基因为研究对象,设计引物,扩增目的片段并制备阳性质粒标准品,对单重PCR及多重PCR的扩增条件进行优化及特异性、敏感性分析,最终建立快速检测三种食源性寄生虫病原的多重PCR方法。扩增目的片段长度分别为旋毛型线虫202bp、华枝睾吸虫388bp、弓形虫737bp;将三个目的基因的测序结果与GeneBank中发表的序列进行同源性比较,结果均在98%以上。本方法特异性强,可检测到旋毛型线虫、华枝睾吸虫以及弓形虫阳性质粒最小拷贝数分别为:103、105及103,与单重PCR检测结果相同。该方法的建立可以同时检测三种食源性寄生虫病病原,操作简单、检验周期短、特异性和灵敏度高,能够实现快速地对食品中的寄生虫病病原的检测和监控。更多还原