Tet-on系统在鸡胚成纤维细胞中诱导表达条件的优化

【作者】 龚萍； 李亦然； 王雪峰； 杨宇； 杨永平； 俸艳萍； 李世军； 彭秀丽； 龚炎长；

【机构】 华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室；

【摘要】 Tet-on系统是一种高效无毒、具有严密开/关功能的基因调控系统。脂质体转染法是较为常用的将外源基因转入细胞的方法,在转染过程中,很多因素会影响脂质体的转染效率,为了尽可能提高转染率及外源基因的表达水平,试验中对转染及诱导表达条件进行了优化。结果表明:当pBI-EGFP-EGFP:pCAGGS-rtTA2^s-M2为1:2,质粒DNA:Lipofectemine^TM 2000为1:2.5,转染后6h加入Dox终浓度为1μg/mL,诱导12h可获得较为满意的表达水平,转染率可达（32.0±3.1）%。Tet-on系统在鸡胚成纤维细胞中的有效转染及GFP的高效表达,为下一步在CEF中进行外源目的基因的功能研究奠定了良好的基础。更多还原