舟山眼镜蛇细胞毒素CTXn抑制吗啡CPP表达的实验研究

【作者】 仲维高； 崔跃； 董伟华； 黄劭； 唐娅； 崔超伟； 周升铭； 刘先国； 孔天翰；

【机构】 广州医学院病理生理教研室； 中山大学疼痛研究中心； 广州医学院蛇毒研究所；

【摘要】 目的:通过观察不同剂量的舟山眼镜蛇(Naja atra Cantor)细胞毒素CTXn对吗啡诱导的条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)行为表达及成瘾后痛敏的影响,进一步探讨其戒毒、镇痛的作用机理,为其药用开发奠定理论基础。方法:(1)SD大鼠连续8天皮下注射吗啡(10mg/kg)形成稳定的CPP后,再腹腔给予不同剂量CTXn(0.5、1.0、2.0mg/kg)连续5天,测试CPP及痛觉变化,大脑切片,免疫组化染色,用LSCM定量观察TNF-α在齿状回的表达;(2)SD大鼠在施吗啡前30分钟腹腔给予不同剂量的CTXn(0.5、1.0、2.0mg/kg),连续8天,观察CTXn预处理对吗啡epp获得的影响;(3)SD大鼠腹腔注射不同剂量CTXn(0.5、1.0、2.0mg/kg),连续8天,观察其自身是否引起CPP;(4)SD大鼠分别腹腔给予CTXn(1.0mg/kg)组或鞘内给予CTXn(0.025mg/kg),连续用药23天在d0、d2、d4、d6、d8、d10、d12、d16、d20、d24测试大鼠的痛域,观察痛域变化,同时在d0、d4、d8、d12、d16、d20、d24采用ELISA法检测血清抗体效价。结果:(1)吗啡成瘾后CTXn后处理可呈剂量依赖性地抑制吗啡诱导的CPP及痛敏。CTXn不同剂量组(0.5、1.0、2.0mg/kg)CPP值分别从成瘾时的451.8±49.2、450.8±72.3及450.7±91.2 s下降到164±49.5、77.4±41.1及68.2±37.2s;大鼠痛敏域值分别从成瘾时的15.5±1.6、15.2±3.2及15.6±2.3s,提高至22.4±1.7、27.5±2.8及28.6±3.6s。(2)吗啡成瘾后,CTXn后处理可明显增加齿状回TNF-α表达,其平均密度值(Mean intensity)较吗啡成瘾组约升高75%。(3)CTXn预处理后,大鼠CPP值未见显著升高,其对吗啡诱导的CP表达有剂量依赖性地抑制作用。(4)CTXn自身不会产生CPP。(5)CTXn腹腔用药16天以后,血清抗体效价逐渐增高,镇痛作用亦相应下降;但CTXn鞘内给药后未见抗体产生及镇痛耐受。结论:(1)眼镜蛇细胞毒素CTXn对吗啡成瘾及痛敏有明显地干预作用,治疗指数较大,安全性较高;(2)齿状回是CTXn作用的中枢部位之一,脑内细胞因子的变化与其调控功能的发挥有一定的关联;(3)CTXn自身不成瘾,鞘内给药可避免引起耐受现象,用于戒毒的远期疗效较好。更多还原