水稻OsRacD及其相互作用蛋白的研究

【作者】 刘肖飞； 侯成千； 王军； 张利娟； 梁卫红；

【机构】 河南师范大学生命科学学院；

【摘要】 OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程。通过酵母双杂交筛选,获得了一些潜在互作蛋白的编码基因。为研究OsRacD蛋白及其互作蛋白的结合特征和作用机制,采用重叠延伸PCR方法,分别在其GTPase结构域中引入G15V、T20N点突变,模拟GTP和GDP结合形式的OsRacD;构建了受控于CaMV35S的与绿色荧光蛋白融合表达的双元植物表达载体,采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,观察突变前后蛋白在活细胞内定位的特点;在酵母双杂交体系和体外pulldown实验对不同活性形式OsRacD与靶蛋白的结合进行了鉴定。结果显示,G15V、T20N点突变可以模拟GTP和GDP结合形式的OsRacD,野生型蛋白在细胞质和细胞膜都有分布,组成型激活的蛋白主要分布在细胞膜上,而失活型蛋白则大都集中到细胞核周围;蛋白相互作用的酵母双杂交体系分析和pulldown实验显示,OsRacD及其两个突变体具有不同的靶蛋白结合特性。本研究证实在不同的鸟苷酸结合状态下,OsRacD蛋白具有不同的活细胞内定位特点,通过与不同靶蛋白的相互作用,引发不同的细胞应答事件。更多还原