人骨髓间充质干细胞的分离培养鉴定及BrdU标记的实验研究

【作者】 张向荣； 刘德伍； 郭光华； 彭燕；

【机构】 南昌大学第一附属医院眼科； 南昌大学第一附属医院烧伤科；

【摘要】 目的:拟在体外建立一种分离纯化,培养扩增、标记骨髓间充质干细胞的方法,为利用MSCs进行基因治疗提供实验基础。方法:人骨髓间充质干细胞由试验者取自临床骨髓穿刺检查正常患者的健康骨髓原代培养,患者对本实验知情同意。密度梯度离心和贴壁培养相结合,分离纯化骨髓间充质干细胞,并用BrdU标记。相差显微镜下观察hBMSCs形态学变化;流式细胞仪检测hBMSCs的表面标记以及细胞周期;绘制hBMSCs的生长曲线;透射电镜观察hBMSCs的超微结构。结果:密度梯度离心结合贴壁法能分离培养出纯度较高的hBMSCs。流式细胞仪检测hBMSCs CD90、CD29、CD44、CD34、CD45阳性表达细胞比率分别为98.48%、98.74%、97.41%、0.36%、0.64%。hBMSCs的生长曲线呈S形。超微结构显示hBMSCs胞质丰富,粗面内质网发达,可见大量蛋白分泌物。免疫组化检测BrdU标记48小时后hBMSCs,其标记率>80%。结论:采用淋巴细胞分离液密度梯度离心和贴壁培养相结合,以获得纯度较高和活性骨髓MSC,是简便可行的方法;BrdU是一种简单、有效的标记骨髓MsCs的方法。更多还原