鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

【作者】 李孝建； 沈雁； 张志； 曾耀英； 李延仓； 杨小红；

【机构】 暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科； 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心；

【摘要】 目的:研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电泳技术展示蛋白质分子的表达,Image Scanner□透射扫描仪及Labscan扫描软件进行扫描获取图像,利用ImageMaster 2D Elite 5.0分析软件对图像进行强度校正、点检测、背景消减、匹配,以获取两种细胞的差异蛋白点;切取差异蛋白点,MOLDI-TOF-TOF质谱仪进行质谱分析,利用软件Mascotdistiller过滤基线峰、识别信号峰,Mascot软件搜索NCBInr数据库(http://www.matrixscience.com),寻找匹配的相关蛋白质,同时查询其功能。结果:两种细胞的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性,表皮干细胞与角质形成细胞的电泳图谱平均蛋白质点数分别为(930±15)、(982±18)个,匹配点数分别为(798±11)、(850±13)个,匹配率分别为85.81%、86.56%;两种细胞蛋白质间匹配点数(868±8)个,匹配率是76.98%;找到差异蛋白质点11个,其中只在表皮干细胞表达或高表达的有8个,只在角质形成细胞表达或高表达的有3个。差异蛋白质点分别进行MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析,鉴定出11个有意义的蛋白质。其中表皮干细胞表达或表达明显增高的8个蛋白质包括Rho GDP解离抑制蛋白□(dissociation inhibitor(GDI))、翻译延长因子1(Translationelongation factor-1)、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、谷胱苷肽S-转移酶(Glutathione S-transferase Mu 2,GSTM-2)、醛糖还原酶(Aldosereductase,AR)等;角质形成细胞表达或表达明显增高的3个蛋白质,包括Nitrilasehomolog 2(Nit 2)、膜联蛋白A5(Annexin A5)和Ubiquitin-protein hydrolase等。结论:利用双向电泳和质谱分析技术,成功分离和鉴定出鼠表皮干细胞和角质形成细胞差异表达的蛋白质。这些差异蛋白质可能与表皮干细胞和角质形成细胞体外增殖、分化特性的差异有一定关系,为进一步研究调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系奠定了基础。更多还原