重组人P53腺病毒基因经介入途径治疗肝癌实验研究

【作者】 罗仕华； 方建林； 周国锋； 郑传胜； 冯敢生； 梁惠民；

【机构】 华中科技大学同济医学院附属协和医院介入放射科；

【摘要】 目的观察重组人p53腺病毒基因(rAd-p53,1×10¹²VP/支)经介入在兔VX2移植性肝癌模型表达特点及治疗效果。方法将60只新西兰大白兔采用移植法建立兔VX2移植性肝癌模型,于移植术11天行磁共振（MRI）、CT检查,计算其体积（V1）。随机抽取27只移植成功的荷瘤兔,平均分成三组:A组:经肝动脉单纯灌注rAd-p53（5×10⁶ VP）;B组:rAd-p53（5×10⁶ VP）+超液态碘油0.5ml/只经肝动脉灌注;C组:瘤内rAd-p53（5×10⁶ VP）直接导入,术后24h、72h、6天分别处死实验兔,通过免疫组织化学方法检测肿瘤组织及瘤周p53和Bax、Bcl-2蛋白的表达。余下30只荷瘤兔随机分成五组观察基因治疗效果,A组:经肝动脉灌注生理盐水0.5ml;B组:经肝动脉灌注超液态碘油0.5ml/只行栓塞治疗;C组:经肝动脉单纯灌注rAd-p53（5×10⁶ VP）;D组:rAd-p53（5×10⁶ VP）+超液态碘油0.5ml/只经肝动脉灌注;E组:瘤内rAd-p53（5×10⁶ VP）直接导入,介入术后14天完成上述影像学检查后计算其体积（V2）,对其增长率进行比较,然后处死实验兔,先行大体病理观察,再分别通过免疫组织化学方法检测肿瘤细胞凋亡、血管内皮因子（VEGF）及Von-Willebrand-factor（Ⅷ因子）表达情况,对Ⅷ因子阳性血管内皮细胞进行微血管（MVD）计数,并结合其病理特征进行分析。所有荷瘤兔术中均行数字减影血管造影检查（DSA）。结果所有60只大白兔经MRI及CT检查证实有57只种瘤成功,成功率95%。免疫组化检测表达组中P53和Bax蛋白均有表达,于72h达到最高峰,以C组表达率最高;Bcl-2蛋白表达以C组表达率最低,在72h达最低点。治疗组中治疗前肿瘤体积无显著性差异（P>0.05）,治疗后肿瘤体积及肿瘤增长率比较均不相同,以D组为低。各组间肝表面转移灶及显微镜下瘤周0.5cm肝组织转移灶不相同(P（0.05）,组间比较以D组最低。五组肿瘤细胞平均凋亡率不同（P<0.05）,以E组最高。五组VEGF阳性率分别为50.0%、83.3%、83.3%、50.0%、50.0%,五组间MVD不相同（P<0.05）,以D组最低;MVD与VEGF之间存在较好的相关性。结论 p53、Bax、Bcl-2蛋白在兔VX2肝癌模型中的表达呈现时间曲线关系;经介入途径导入重组人p53腺病毒基因能安全高效促进兔VX2肝癌细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成进而抑制肝癌细胞复发转移;不同的rAd-p53介入导入方式对肝癌治疗效果不同,以与常规介入治疗联合灌注最为有效,瘤内及瘤周直接注射方式次之,单纯肝动脉灌注稍差。更多还原