前列腺癌抗原-1基因复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达

【作者】 程传宇； 刘秉乾； 武玉东； 邹华伟； 高建光；

【机构】 郑州大学第一附属医院泌尿外科；

【摘要】 目的:构建携带前列腺癌抗原-1(PCA-1)基因的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其在真核细胞中的表达。为进一步研究和开展靶向PCA-1基因免疫治疗提供实验基础。方法:利用质粒pET-30a-PCA-1为模板,行PCR扩增、酶切获得PCA-1cDNA片段,并插入腺病毒穿梭质粒pAdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-PCA-1,经293A细胞包装成复制缺陷型腺病毒Ad-PCA-1。将Ad-PCA-1体外感染前列腺癌细胞株DU145细胞,利用蛋白质印迹法检测目的基因表达。结果:构建了携带PCA-1基因的复制缺陷型腺病毒,病毒滴度1.4×109pfu/ml,能有效感染前列腺癌细胞DU145细胞,转然率约86﹪,并经蛋白质印迹法检测到相对分子质量约100000的目的蛋白PCA-1在DU145中表达。结论:PCA–1是Noboru等利用荧光差异显示分析(fluorescent differential display analysis)技术克隆出一种新的人类基因,其仅在前列腺癌细胞株及组织标本中表达。成功构建了表达PCA-1基因的复制缺陷型腺病毒载体,并且在真核细胞中获得高效稳定表达,为进一步研究前列腺癌的生物学特性、转导PCA-1基因的树突状细胞疫苗研制及开展靶向PCA-1的基因免疫治疗提供了实验基础。更多还原