灭活SV40致敏的猴树突状细胞的生物学特性研究

【作者】 葛长勇； 李鸿钧； 孙茂盛； 冯婷婷； 靳昌忠； 姚航平； 吴南屏；

【机构】 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室； 中国医学科学院医学生物学研究所；

【摘要】 目的:探讨灭活SV40致敏的猴外周血来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)的生物学特性。方法:采用密度梯度离心法从恒河猴外周血分离出单个核细胞,然后采用玻璃黏附法分离淋巴细胞和单核细胞,使用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Recombinant Human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,rhGM-CSF)扩增单核细胞,使用重组人白细胞介素4(Recombinant Human Interleukin-4,rhIL-4)诱导单核细胞向树突状细胞方向分化,使用SV40全病毒灭活疫苗作为冲击抗原,使用重组人肿瘤坏死因子(Recombinant Human Tumor Necrosis Factor,rhTNFα)促其成熟。分别于普通光学显微镜、相差显微镜、扫描电镜下观察细胞形态。使用流式细胞术分析细胞表型特征。使用~3H-TdR掺人法测定混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)中DC刺激自体及同种异体T细胞增殖的效应。使用辣根过氧化酶(HRP)内吞实验检测其群体内吞能力。结果:使用hGM-CSF可以有效促进猴DC前体的增殖,细胞生长曲线显示,细胞增殖在第8天达到增殖高峰。使用rhIL-4可以成功诱导猴DC的分化。光镜下可见大小形态各异的树突状细胞。扫描电镜下可见吞噬SV40抗原后的形成的大量面纱DC的形态。细胞吞噬能力测定显示,细胞在第6天吞噬能力最强。MLR显示体外扩增诱导的DC能够有效刺激T细胞增殖。流式细胞术表型分析显示,表达树突状细胞CD1a特异性标志的细胞比例可达77.7%,表达树突状细胞CD83成熟标志的细胞比例可达56.5%。rhTNFα具有促进猴DC成熟的作用。结论:rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNFα可用于猴DC的扩增、诱导和成熟刺激。灭活SV40致敏的猴外周血来源的DC在MLR中能够有效刺激T细胞增殖。体外灭活SV40抗原冲击的DC多表现为循环DC的形态。更多还原