儿童急性淋巴细胞白血病AKAP12启动子区域异常甲基化及其意义

【作者】 刘维薇； 徐翀； 关明； 张一佳； 吕元；

【机构】 复旦大学附属华山医院检验医学科； 上海儿童医学中心检验科；

【摘要】 目的研究发现A激酶锚定蛋白12(A-kinase anchoring protein 12.AKAP12或AKAP250或Gravin).在多种肿瘤中缺失或者下调.启动子甲基化可能是其去表达的重要原因之一。儿童急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia.ALL)是儿童期发病率最高的恶性肿瘤.也是导致儿童死亡的重要原因。本研究探讨儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)中A激酶锚定蛋白12(A-kinase anchoring protein 12,AKAP12)基因启动子区域CpG岛异常甲基化情况及其与临床病理参数之间的关系。方法用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR.MSP)检测32例儿童急性淋巴细胞白血病患者的骨髓.10例对照骨髓以及淋巴细胞白血病细胞株6T-CEM中AKAP12基因启动子区域CpG岛甲基化状态.并采用亚硫酸盐测序的方法检测启动子区发生甲基化的频率。采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction.RT-PCR)检测6T-CEM中.经过甲基化酶抑制剂5-aza- deoxycytidine(5-Aza-CdR)处理后.AKAP12恢复表达的情况。结果在32个患者骨髓中.MSP结果显示AKAP12基因甲基化比率为62.5%(20/32).但与患者的临床病理学参数均无显著相关。在10例对照骨髓中均未检出阳性。经过5-Aza-CdR处理后.发现AKAP12重新恢复表达.5-Aza-CdR1μmol/L和5μmol/L的浓度分别是该基因的表达提高6.67倍和10.27倍.显示5-Aza-CdR对AKAP12基因的上调呈剂量依赖性。不同标本17个位点发生甲基化的频率并不相同,其中位点3、6、8、9、10、11、12和13出现甲基化的频率较高。结论AKAP12基因启动子的异常甲基化与儿童急性淋巴细胞白血病的发生有密切的联系.AKAP12是一个重要的肿瘤生长的负调节基因.启动子甲基化可能是其去表达的重要原因之一。AKAP12基因启动子甲基化有望成为一个诊断儿童急性淋巴细胞白血病的分子标志物。更多还原