人纤溶酶原Kringle1-3功能区基因的纯化表达及生物活性鉴定

【作者】 胡朝晖； 高宗银； 甘舜进； 曾征宇； 刘元力； 朱庆义；

【机构】 广州市第一人民医院； 广州金域医学检验中心；

【摘要】 目的通过构建人纤溶酶原kringle1-3功能区基因非融合原核表达载体,诱导表达并纯化kringle1-3蛋白,验证其生物活性。方法:构建含K1-3基因的表达载体pET/K1-3;转化表达宿主菌BL21(DE3)诱导表达K1-3基因;表达产物经溶解、复性和纯化后通过细胞抑制实验(MTT法)和鸡胚绒毛膜尿囊膜实验(Chorioallantoic membrane,CAM)鉴定纯化产物对血管内皮细胞增殖与迁移的抑制效果。结果:通过SDS-PAGE电泳以及western-blot分析结果证实K1-3基因确实获得高效表达。细胞抑制实验和CAM实验表明表达产物具有特异抑制血管内皮细胞的功能。结论:所纯化的kringle1-3蛋白具有特异抑制血管内皮细胞的生物学活性,可为该蛋白在病理性血管疾病等方面的应用研究提供材料。更多还原