采用高分辨多级质谱LC-IT-TOF/MS法鉴定猪体内三聚氰胺代谢物

【作者】 梁艳； 王广基； 谢林； 蔡勤仁； 刘晓东； 郝海平；

【机构】 中国药科大学药物代谢动力学重点实验室； 中华人民共和国珠海出入境检验检疫局；

【摘要】 目的:三聚氰胺（Melamine）是一种三嗪类含氮杂环有机化合物。大量研究表明,长期摄入三聚氰胺会造成动物生殖、泌尿系统的损害,膀胱、肾部结石,并可进一步诱发膀胱癌。有文献报道,三聚氰胺在动物体内能迅速代谢,那么其代谢物是否与其致毒机制相关呢?本研究将采用以高分辨多级质谱LC-IT-TOF/MS法鉴定猪体内三聚氰胺的代谢物,为三聚氰胺的致毒机制研究提供一定的理论依据。方法:分别取对照组和长期给予三聚氰胺组猪的尿液,用甲醇稀释10倍,采用岛津LC-IT-TOF/MS进行代谢物的检测及其结构推断。色谱条件为:采用Waters HILIC 3.0μm 2.1 mm×50 mm色谱柱,柱温35℃,流动相为含0.01%甲酸的乙腈和水,以梯度洗脱模式进行色谱分离,流速为0.2 ml/min;质谱条件为:离子源为ESI,离子极性为Pos-itive,分段进行检测,扫描范围分别为m/z 80-200、200-400、400-1000,检测电压为1.60 kV,雾化气流速为1.5 L/min,干燥气流速为4.0 L/min,TOF真空度为1.5×10^-4 Pa,IT真空度为1.7×10-2 Pa,诱导解离碰撞时间为30 ms,多级MS碰撞能量为50%;然后以MetID Solution软件寻找代谢物,再根据碎片离子的准确质量数推断原药及其代谢物的断裂方式,从而对代谢物的结构进行推断。结果:在该实验条件下,三聚氰胺及其代谢物峰形良好,分离度较高;在m/z 80-200范围内,分别检测出m/z 143.0681和m/z 144.0997两种主要代谢产物,多级碎裂后对其结构进行推断,得出这两种代谢产物是通过三聚氰胺的氧化和+NH3形成;在m/z 200-400范围内,分别检测出m/z 351.1053和m/z 365.1210两种主要代谢产物,二级碎裂后发现:其碎片离子分子量与三聚氰胺一致,然后进行三级碎裂,发现其碎片离子与三聚氰胺的碎片离子相同,这就说明这两种代谢产物均为三聚氰胺的Ⅱ相代谢产物,经与文献比较后发现,这两种代谢产物可能为三聚氰胺的间苯二氧乙酸结合物和甲基化的间苯二氧乙酸结合物,这两种结合物可能与结石的形成有着一定的联系。结论:三聚氰胺在猪体内既可以形成氧化和+NH3的Ⅰ相代谢产物,又可以与间苯二氧乙酸和甲基化的间苯二氧乙酸相结合,形成Ⅱ相代谢产物。更多还原