喹啉类化合物BB抗肿瘤作用研究

【作者】 孙启明； 缪泽鸿； 林莉萍； 桂敏； 谢华； 段文虎； 丁健；

【机构】 中国科学院上海药物研究所,新药研究国家重点实验室,肿瘤药理组；

【摘要】 目的:BB是中国科学院上海药物研究所自主研发的EGFR抑制剂。该化合物属于新结构喹啉类化合物,具有良好的水溶性。本研究主要探讨了BB的体内外抗肿瘤作用及其作用机理。方法:采用ELISA方法,研究BB在分子水平对酪氨酸激酶的抑制作用;采用噻唑兰（MTT）法和磺酰罗丹明B蛋白染色（SRB）法检测BB对不同组织来源的肿瘤细胞的细胞增殖抑制作用;采用内皮细胞迁移、管腔形成、动脉环出芽试验研究BB对新生血管的抑制作用。此外,选取了两种最常见的EGFR敏感型突变基因L858R、A750P,采用逆转录病毒将其基因转入正常的小鼠成纤维细胞NIH-3T3中,使之具有成瘤性,在此基础上建立两种裸鼠移植瘤模型,在致病原因单一的情况下研究BB的体内抗肿瘤效果。结果:BB对EGFR的抑制活性在纳摩尔数量级,而对其他激酶的抑制能力较弱,甚至对于同一家族受体ErbB2,其IC₅₀也在微摩尔水平,其抑制浓度比对EGFR的高近200倍,显示出BB优良的选择性。进一步用人肿瘤A549细胞研究显示BB明显抑制EGF刺激的EGFR、ERK1/2、AKT的磷酸化,表明BB对EGFR及其下游信号通路产生了重要影响。而且BB对血清刺激的A549增殖的半数抑制浓度(IC₅₀=15.3±2.4μM)远大于对EGF刺激的A549增殖的半数抑制浓度(IC₅₀=0.23±0.11μM),显示BB能更有效抑制EGF刺激的A549增殖,这些结果证实了BB高选择性抑制EGFR及其信号转导,从而抑制肿瘤细胞增殖。进一步研究显示BB还具有很强的抗新生血管生成作用。BB可从多个环节抑制新生血管生成。BB在1/μM的浓度下即能明显抑制肿瘤细胞分泌促血管生成因子,并能直接抑制HMEC-1细胞的迁移及管腔形成;半体内实验发现其在5μM浓度时即几乎完全抑制大鼠动脉环微血管萌发。BB对肿瘤细胞的增殖抑制作用和抗新生血管生成作用最终体现为其良好的体内抗肿瘤活性。该化合物在两种突变EGFR诱发的NIH-3T3裸小鼠移植瘤模型上均显示良好的抗肿瘤作用,完全抑制肿瘤的形成和生长。结论:本研究通过体外分子、细胞水平和体内动物模型水平较为全面系统的阐述了BB作为一个新的喹啉类EGFR抑制剂在抗肿瘤活性方面的优势,探索了其抗肿瘤的作用机理,为该化合物进一步的新药研发工作提供了重要的实验支持和理论依据。更多还原