新型Src激酶抑制剂PH006的抗肿瘤作用研究

【作者】 马金贵； 黄河； 蒙凌华； 柳红； 丁健；

【机构】 中国科学院上海药物研究所,新药研究国家重点实验室,肿瘤药理组； 中国科学院上海药物研究所,新药研究国家重点实验室,DDDC药物化学合成研究室；

【摘要】 目的:以酪氨酸激酶为靶点的药物研发是目前抗肿瘤研究领域的热点。PH006是中国科学院上海药物研究所设计合成的新型选择性Src酪氨酸激酶抑制剂。本研究主要探讨了PH006的体内外抗肿瘤作用及其初步的作用机制。方法:利用建立的基于酶联免疫反应（ELISA）的蛋白酪氨酸激酶抑制剂的分子筛选模型检测PH006在分子水平上对各种酪氨酸激酶的抑制作用;Western Blot方法检测PH006对MDA-MB-231细胞中的Src及下游信号分子FAK,Paxillin的磷酸化的影响;采用磺酰罗丹明B蛋白染色（SRB）法和克隆形成法检测PH006对MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞术（FACS）检测PH006对MDA-MB-231细胞周期的影响;利用细胞黏附实验、划痕实验和Transwell实验检测PH006对MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞黏附、迁移和侵袭的影响;采用明胶酶谱实验和ELISA方法分别检测PH006对MDA-MB-231细胞MMP2/9和HGF分泌的影响;以人乳腺癌MDA-MB-435裸小鼠移植瘤为模型,研究PH006的体内抗肿瘤生长和抗转移作用。结果:PH006是一个选择性的Src激酶抑制剂,对Src酪氨酸激酶催化活性抑制的IC₅₀值为0.38μM,对c-Abl和c-kit也有一定的抑制能力,IC₅₀分别为1.9和5.5μM,而对其他10种酪氨酸激酶活性的抑制作用较弱。PH006能显著下调MDA-MB-231细胞中Src及其下游信号分子FAK、Paxillin的磷酸化水平。PH006剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞的增殖,并诱导其阻滞于G1期。此外,PH006能有效抑制MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞的黏附、迁移和侵袭,下调MDA-MB-231细胞MMP2/9和HGF的分泌。体内实验结果显示PH006能明显抑制乳腺癌细胞MDA-MB-435裸小鼠移植瘤的生长和肺转移。结论:PH006是一个新型的选择性Src激酶抑制剂,具有良好的抗肿瘤转移作用和一定的抑制肿瘤生长作用,其抗肿瘤作用及机制研究为此类化合物作为Src激酶抑制剂的研究和开发提供了重要的实验证据和思路。更多还原