免疫试纸条RT-PCR复合检测马铃薯病毒

【作者】 田永蕾； 刘梅； 张永江； 刘冬梅； Richard Holmes； 李明福； 马洁；

【机构】 安德珍生物技术有限公司； 中国农业大学农学与生物技术学院； 中国检验检疫科学研究院动植检所；

【摘要】 马铃薯是一种重要的粮食作物和经济作物,但在生长过程中却极易受到各种有害生物的为害,其中病毒病害就达20余种,成为很多地区马铃薯生产的重要制约因素。快速检测试纸条基于横向流动免疫测定技术,具有简单、快速并且可靠的特点,非常适合应用在田间检测,本研究在试纸条基础上建立起RT-PCR复合检测技术,即先用试纸条免疫捕获目标病毒,然后用刀片刮下C线或T线作为模板直接进行RT-PCR,不仅省去了普通RT-PCR提取总RNA的步骤,节约了时间,而且可以放大核酸信号,提高检测灵敏度,是对快速检测试纸条检测结果的验证和复核。实验以PVA和PVY的快速检测试纸条为例,通过摩擦接种将PVY接种到三生烟上,PVA接种到本氏烟上,置于温室中培养,取症状明显的叶片材料作为实验材料。按照免疫试纸条的操作说明,先用试纸条检测,再用干净的刀片刮下T线和C线做RT-PCR验证试验。其中PVY的预扩增片段为480bp左右,PVA的预扩增片段为1 000bp左右,覆盖外壳蛋白的全序列。结果显示利用快速检测试纸条检测PVY和PVA,在控制线和检测线上均出现明显的条带。分别刮下控制线和检测线进行RT-PCR反应,结果均能扩增到目的条带。利用快速检测试纸条结合RT-PCR检测的方法,拓展了快速检测试纸条应用范围,既可以作为检测产品,直接得到检测结果,又可作为提取设备,省去RNA提取步骤,直接进行RT-PCR复核,节约了大量时间。并且用快速产品检测之后,在一周内用RT-PCR检测仍然有效,可允许使用者在田间检测更多的样品而不用立即返回实验室,此外快速检测设备携带和运输方便,比直接携带感病材料更安全,可从较远的地方检测之后再邮寄到实验室验证。这种方法非常适合马铃薯田间病毒病的疫情调查。更多还原