眼镜蛇磷脂酶A2抗小脑颗粒神经元凋亡与酶活性关系

【作者】 王锦群； 苏秀容； 黄守坚；

【机构】 中山大学医学院药理学教研室；

【摘要】 目的了解眼镜蛇磷脂酶A2对5K引起的培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用并探讨其保护作用与磷脂酶A2活性的关系。方法眼镜蛇磷脂酶A2用DEAE-sephadexA50、CM sephadexC50和Sephadex G75连续柱层析分离,用SDS聚丙烯酰胺电泳鉴定其纯度及测定分子质量,用Edman法确定其N-末端氨基酸序列:磷脂酶A2活性用滴定其水解底物酸度来确定;培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡用低钾(5 mM)诱发,用Hoechst33258核染色在荧光显微镜下确定凋亡神经元。结果纯化眼镜蛇磷脂酶A2在SDS聚丙烯酰胺电泳呈单一区带,分子质量为14 kDa,N-端20个氨基酸序列为LYQFKNMIQCTVPSRSWWD-,通过对照蛋白质资料库确定其为磷脂酶A2;在5K培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡神经元在核染色下可见典型的核固缩,纯化眼镜蛇磷脂酶A2有剂量依赖性抑制作用,其IC50为6.39μg/L,95%可信限为3.22～12.69μg/t,,其作用不能被磷脂酶A2活性抑制剂7,7-methyleicosadienoic acid(DEDA)拮抗;用Carbodiimide和semicarbazide对眼镜蛇磷脂酶A2的羧基进行修饰,使磷脂酶A2活性降低80%,但其抗大鼠小脑颗粒神经元凋亡效价强度无明显改变,然而,用80℃处理眼镜蛇磷脂酶A2 30 min,其磷脂酶A2活性仅下降10%,但其抗凋亡作用基本丧失,即使加大剂量至同等磷脂酶A2活性,其抗凋亡作用仍不能恢复。结论眼镜蛇磷脂酶A2能对抗5K引起的大鼠小脑颗粒神经元凋亡,其作用与其磷脂酶A2活性无关。更多还原