体内外下调VEGF-C基因表达抑制乳腺癌细胞增殖的研究

【作者】 李鲲； 张金玉； 侯琳； 葛银林；

【机构】 青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室；

【摘要】 血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C VEGF-C)是近年来发现的VEGF家族新成员,它通过对肿瘤间质新生淋巴管内皮细胞的增殖和迁移的调控,促进肿瘤的淋巴管形成。本研究应用经过化学修饰的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)在体内外抑制VEGF-C基因的表达,探讨化学修饰的siRNA介导的RNA干扰技术对乳腺癌基因治疗的可行性和特异性。本研究设计针对VEGF-C基因的小干扰RNA,选用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000作为转染试剂,以脂质体转染法分别将双链siRNA导入人乳腺癌细胞株MCF-7细胞和裸鼠移植瘤后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT比色法)检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响。通过Hoechst33258染色观察MCF-7细胞的凋亡。采用逆转录联合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印记试验分别检测体内外VEGF-C siRNA处理组和对照组的mRNA及蛋白水平表达变化。采用MTT数据统计处理结果显示:VEGF-C siRNA三个浓度组抑制率与脂质体组比较有显著性差异(P<0.01);错义序列组(即siRNA组)与脂质体组比较没有显著性差异(P>0.05)。100 nmol/L组和200 nmol/L组之间无显著性差异(P>0.05)。Hoechst 33258荧光染色显示转染siRNA 72 h后细胞内可见凋亡小体。体外实验和裸鼠体内实验结果都显示VEGF-C基因mRNA和蛋白水平表达明显降低(P<0.01),体内外对照组各指标无显著变化。试验结果表明化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内外均能成功下调靶基因VEGF-C的表达,抑制MCF-7细胞增殖,并对MCF-7细胞有明显的凋亡诱导作用。更多还原