【作者】 陈瑜； 黄燕愉； 许云禄；

【机构】 福建医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系； 福建医科大学药学院药理系蛇毒研究所；

【摘要】 蛇毒是一种成分复杂的天然生物毒素,含有多种酶类和药理活性多肽,其中细胞毒素（CTX）在体外对多种瘤细胞具有直接溶解作用。从蛇毒中分离细胞毒素资源有限,成本高技术难,质量标准难统一,因此本研究探讨应用基因克隆的方法,构建CTX表达载体,在大肠杆菌中表达CTX重组蛋白。从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素（CTX）,测定N-末端及C-末端的氨基酸序列并据此设计引物,P1:5’-GGGGTACCAAAACTCTGCTGCTGACCTTG-3’,P2:5’-CGAGCTCTCAGTTGCATCTGTCTGTATTG-3’,RT-PCR扩增CTX cDNA。经Kpn I and Sac I双酶切,与克隆载体pET42α连接,获得重组DNA（CTX-pET42α）,转化至大肠杆菌DH5α。单克隆（CTX-pET42α-DH5α）增殖后,抽提质粒,并用Kpn I and Sac I双酶切图谱分析、T7引物PCR和DNA序列测定,鉴定阳性转化子DNA序列,该序列与文献报导的蛇毒CTX基因序列一致;将鉴定确认的阳性转化子重组质粒（CTX-pET42α）,应用CaCl₂法转化至表达菌E.coli BL21中,为开发应用眼镜蛇毒CTX,进行CTX的药学研究做准备。更多还原