WAVE1基因在白血病细胞多药耐药性中的作用

【作者】 康睿； 曹励之；

【机构】 中南大学湘雅医院儿科；

【摘要】 【目的】探讨 WASP 家族 Verprolin 同源蛋白1（WAVE1）基因在 K562/A02白血病细胞多药耐药机制中的作用。【方法】将 pEFBOS-WAVE1真核表达质粒转染 K562细胞构建 WAVE1高表达的 K562细胞系,将 WAVE1基因的特异性小片段干扰 RNA（WAVE1 siRNA）转染 K562/A02细胞构建 WAVE1 低表达的 K562/A02细胞系。Western blot 和 RT-PCR 法检测基因转染前后 K562/A02及 K562细胞 WAVE1基因及蛋白的表达;WST8法检测阿霉素对转染前后细胞的半数抑制浓度(IC₅₀);Hoechest33258染色检测细胞形态学改变并计算凋亡细胞百分率;RT-PCR 检测多药耐药基因 mdr1 mRNA 表达;Western blot 检测抗凋亡蛋白 Bcl-2表达。【结果】 （1）与 K562细胞相比,K562/A02细胞 WAVE1 mRNA 表达水平增加70%,蛋白表达水平增加63%。（2）转染 WAVE1 基因的 K562细胞 WAVE1过表达,并降低了对阿霉素的药物敏感性,使 IC₅₀从转染前的（0.05±0.00）μg/ml,增加到（2.99±0.12）μg/ml,在阿霉素浓度为1μg/ml、 5μg/ml 时,凋亡细胞百分率分别下降30%、35%。（3）转染 WAVE1 siRNA 的 K562/A02细胞 WAVE1蛋白表达水平与未转染组相比明显降低,并可增强对阿霉素的药物敏感性,使 IC₅₀从转染前的（4.29±0.15）μg/ml,下降到（1.85±0.07） μg/ml,阿霉素浓度为1μg/ml、5μg/ml 时,凋亡凋百分率分别增加24%、21%。 （4）转染 WAVE1的 K562细胞 mdr1基因和 Bcl-2蛋白表达水平均增高,而转染 WAVE1 siRNA 的 K562/A02细胞 mdr1基因和 Bcl-2蛋白表达水平比转染前明显降低。【结论】 WAVE1参与了 K562/A02细胞多药耐药性形成,其机制可能与调控 mdr1和 Bcl-2水平有关。更多还原