人巨噬细胞金属弹力酶催化域基因原核表达载体的构建与鉴定

【作者】 鲍德明； 胡乃中； 沈际佳； 石海； 许建明；

【机构】 安徽医科大学第一附属医院消化内科；

【摘要】 <正>目的构建能在大肠杆菌中表达人巨噬细胞金属弹力酶催化域(HMEcd)蛋白的原核表达载体,用于表达活性 HMEcd 蛋白及其体内外功能研究。方法根据 GenBank 中 HME cDNA 序列,使用 Primer Pre- mier5．0软件设计一对引物,以选择性扩增其催化域(507bp)。用 Invitrogen Trizol Reagent 从人胃癌组织提取总 RNA,再用 Promega 逆转录试剂合成 cDNA 第一链,PCR 扩增 HMEcd 基因,将 PCR 产物行1%琼脂糖凝胶电泳40 min,紫外灯下观察并切取扩增目的基因条带的琼脂糖凝胶,用胶回收试剂盒回收纯化后与 pMD18-T 载体连接,构建克隆载体 pMD18-T-HMEcd,转化感受态大肠杆菌 DH5α,进行蓝白筛选。更多还原