甲醛诱导内皮细胞ADMA代谢紊乱及其机制

【作者】 贺彬琪； 让蔚清；

【机构】 湖南省南华大学公共卫生学院；

【摘要】 目的观察甲醛对内皮细胞不对称性二甲基精氨酸(ADMA)代谢的影响,分别从氧化损伤及 DNA-蛋白质交联两个方面分析甲醛影响 ADMA 代谢的特征,研究甲醛对内皮细胞损伤的可能机制。方法利用甲醛与人脐静脉内皮细胞共培养建立细胞实验模型,采用 DMEM(低糖)培养基培养人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12),取生长良好的3～6代细胞进行实验。分为实验组(分别加入终浓度为6．25、12．5、25、50、100、200 和400μmol/L 的甲醛)和对照组(加入等体积的 PBS 溶液),采用丙酮酸二硝基苯腙比色法、二硫代二硝基苯甲酸比色法、黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法、化学比色法、高效液相色谱法、 KCL-SDS 沉淀法、SigmaPlot 8．0作图。结果 (1)甲醛对内皮细胞的损伤,在本研究所用的剂量范围内,表现出2个特点：6．25 ～25．00μmol/L 甲醛组使细胞上清液 LDH 漏出下降,50．00～ 400．00μmol/L 甲醛组使细胞上清液 LDH 漏出升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0．05)；(2)甲醛诱导氧化损伤,低剂量(＜12．50μmol/L)甲醛对细胞内 GSH 含量和 SOD 活力的影响与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05)；高剂量(＞ 12．50μmol/L)甲醛能明显降低细胞内 GSH 含量和 SOD 活力,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0．05)；细胞上清液 MDA 的含量随着甲醛浓度的增加而升高,与对照组相相比差异有统计学意义(P＜0．05)；(3)甲醛对 ADMA/eNOS 的影响,甲醛呈浓度依赖性的诱导细胞上清液 ADMA 产生,并抑制细胞内 DDAH Ⅱ活性,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0．05)。低剂量(＜12．50μmol/L)甲醛显著提升细胞内 eNOS 活性,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0．05)；高剂量(＞12．50μmol/L)甲醛呈浓度依赖性显著降低细胞内 eNOS 活性(P＜0．05)。(4)甲醛诱导 DNA-蛋白质交联,6．25～12．50μmol/L 甲醛组诱导细胞内 DPC 交联率与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05)； 25．00～400．00μmol/L 甲醛组促进细胞内 DNA、蛋白质发生交联,DPC 交联率与对照组相比差异有统计学意义(P＜0．05)。结论 (1)甲醛诱导人脐静脉内皮细胞 ADMA 代谢紊乱,表现为呈浓度依赖性诱导内皮细胞 ADMA 产生。(2)甲醛诱导 ADMA 代谢紊乱可能与氧化损伤和(或)DNA-蛋白质交联所致 DDAHⅡ活性降低有关。更多还原