大鼠嗅鞘细胞体外培养及免疫组化研究

【作者】 鲁凯伍； 闫慧博； 金大地； 江建明；

【机构】 南方医科大学南方医院脊柱骨病外科；

【摘要】 目的建立体外纯化培养嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs） 的稳定方法并观察嗅鞘细胞（OECs）形态学特征和生长特点。方法原代培养成年雄性 SD 大鼠嗅球的嗅神经层和颗粒层中提取的 OECs,利用改良 Nash 差速贴壁法和阿糖胞苷（Ara-c）抑制法除去混杂的成纤维细胞和星形胶质细胞以获得纯化的 OECs。用 P⁷⁵ 特异性抗体免疫组织化学染色鉴定 OECs,计算纯化度。结果在纯化培养第十天时,此方法获得的 OECs 纯度可达93%以上。OECs 的外形主要以突起细长的双极和三极为主, 或无突起呈"煎蛋样",嗅鞘细胞轴突相互交织成网状,随时间延长细胞生长排列呈现一定方向性。P⁷⁵抗体免疫组织化学染色示嗅鞘细胞胞核浓染而轴突淡染,成纤维细胞及星形胶质细胞皆清淡染色,差别明显。随着纯化嗅鞘细胞培养时间延长,嗅鞘细胞的生长活性逐渐减弱。嗅鞘细胞纯化培养2周后, 残存的成纤维细胞逐渐增多,至纯化培养3 周时嗅鞘细胞纯度不及30%、细胞活力明显不足,部分嗅鞘细胞出现轴突萎缩及胞核出现空泡现象。结论此方法稳定易复制,可获得高纯度的 OECs,但纯化的嗅鞘细胞生长活性随时间延长而逐渐衰退,无法进行传代培养。更多还原