虎斑游蛇中国大陆亚种(Rhabdophis tigrinus lateralis)颈背腺结构及其毒液中蛋白水解组分RT-2组分的研究

【作者】 和七一； 余晓东； 邓敏； 李卉； 陈夏； 林奕辛；

【机构】 重庆师范大学生命科学学院重庆市动物生物学重点实验室重庆市生物活性物质工程研究中心；

【摘要】 虎斑颈槽蛇中国大陆亚种（Rhabdophis tigrinus lateralis）是我国分布较广,数量较多的蛇类之一,为无管无沟的后毒牙蛇类,颈背部具有特殊的腺体,可以分泌毒液。肉眼观察发现腺体呈珠球状,8～13对腺体呈平行排列,腺体间隔分布;组织切片观察发现,腺体上无开口,无合成毒液的细胞器:实验表明毒液有神经毒性,对小白鼠的半致死量（LD50）为97.99 mg/kg,SDS-PAGE 电泳呈现4条蛋白条带。对虎斑颈槽蛇颈背部结构进行观察研究:测定毒液对小鼠的半数致死量(LD₅₀); 毒液对大肠杆菌和金黄色葡萄糖菌均无抑制活性:酶活性测定结果显示:毒液具有蛋白水解酶活性, 明胶水解酶活性以及纤维蛋白原水解酶活性,无磷脂酶 A₂（PLA₂）活性和碱性磷酸单酯酶活性; 未检测到出血毒素活性,溶血活性以及凝血活性。通过离子交换和凝胶过滤层析的方法,从颈背腺体毒液中分离纯化得到一具有蛋白水解活性的 RT-2组分,SDS-PAGE 电泳显示为单一条带,分子量为81KDa。以酪蛋白为底物测得其蛋白质水解酶比活力为0.56U/mg,最适作用温度为40℃, 最适 pH 为8;EDTA,EGTA,β-巯基乙醇对酶活力有明显的抑制作用,而 PMSF（丝氨酸蛋白酶抑制剂）对酶活力的影响相对较小:K⁺对酶活力有明显的抑制作用,Ca²⁺和 Zn²⁺对其活性有增强作用; 当实验剂量为20μg时,RT-2组分无磷脂酶A、5’核甘酸酶、碱性磷酸单酯酶和磷酸二酯酶活性; 也无水解纤维蛋白（原）活性和凝血活性;RT-2组分不诱导小鼠皮下出血。更多还原