重组Decorin液相拮抗TGF-β1刺激增生性瘢痕成纤维细胞作用及其Smad信号转导机制的研究

【作者】 张志； 李孝建； 梁达荣； 李叶扬；

【机构】 暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院烧伤整形外科；

【摘要】 目的研究 decorin 在液相抑制 TGF-β1刺激正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成的作用,从 Smad 信号转导通路探讨 decorin 抑制 TGF—β1作用的机理。方法分离培养 NSFb 和 HSFb,将5ng/ml TGF-β1或同时与2μg/ml rh—Decorin 加入培养液中;培养12,24,48h 用 MTT 法测定细胞增殖速度;培养24h 用流式细胞仪检测细胞周期,并收集细胞培养上清,放射免疫方法检测 PCⅠ、PCⅢ含量。将 NSFb 和 HSFb 分别分为对照组、Decorin 处理组、TGF-β1 处理组、TGF—β1+Decorin 处理组,培养24h 提取 NSFb 和 HSFb 胞浆中和胞核内总蛋白,用 Western blot 方法检测胞核内 Phospho-Smad2(Ser465/467)、Smad3、Smad4蛋白和胞浆中 Smad3、Smad4蛋白的含量。结果 TGF-β1促进正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增殖、增加 S 期百分比、升高 PC Ⅰ、PCⅢ蛋白含量及两者比例(P<0.05或 P<0.01);同时加入 TGF—β1和 rh—Decorin,正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度、S 期百分比、PCⅠ、PCⅢ蛋白含量及两者比例均低于 TGF-β1组 (P<0.05或 P<0.01),且与空白对照组无显著性差异(P>0.05)。对照组和 Decorin 组 NSFb 和 HSFb 胞核内均不表达 Phospho-Smad2(Ser465/467),TGF—β1组核内表达 Phospho-Smad2(Ser465/467), TGF—β1+Decorin 组其含量明显降低(P<0.01);Decorin 组 NSFb 和 HSFb 胞浆、核内 Smad3蛋白表达与对照组比较无显著性差异(P>0.05),TGF—β1组核内 Smad3显著升高(P<0.01),胞浆 Smad3 减少,TGF-β1+Decorin 组核内 Smad3显著低于 TGF—β1组(P<0.05),胞浆 Smad3高于 TGF-β1组; Decorin 组、TGF-β1组、TGF-β1+Decorin 组 NSFb 和 HSFb 核内 Smad4蛋白表达显著均高于对照组 (P<0.05或 P<0.01),胞浆内 Smad4显著均低于对照组(P<0.05或 P<0.01),TGF-β1+Decorin 组与 TGF-β1组比较,胞浆、核内 Smad4蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。结论 Decorin 具有抑制 TGF-β1刺激正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成的作用,Decorin 通过消耗胞浆中的 Smad4阻断 TGF-β1/Smad 信号转导通路,从而抑制 TGF—β1的刺激效应。更多还原