多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征

【作者】 高斌； 肖白； 雷箴； 闫梅； 贾兴元； 王战勇； 袁海昕； 吴燕； 刘敬忠； 邹起练； 黄尚志； 王立荣； 钮淑兰；

【机构】 首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心； 福建医科大学细胞生物学与遗传学系； 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传室； 北京大学第一医院中心实验室；

【摘要】 目的建立一种基于多重实时荧光相对定量 PCR 技术并应用之于唐氏综合征分子诊断。方法选择21号染色体上特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的 TaqMan 探针,在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标ΔCT 值区分唐氏综合征患者与正常人。采用 EB 病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血 B 淋巴细胞转化成永生细胞系作为标准品。结果通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在30ng/μl 时,变异系数最小(＜ 10%),以该浓度的 DNA 作为模板进行批内和批间实验的ΔCT 值重复性好。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P＜0．001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功。结论实时荧光定量 PCR 比较ΔCT 值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。更多还原