大鼠局灶脑缺血再灌注后半暗带区TACEmRNA表达变化与神经元凋亡研究

【作者】 徐海清； 资晓宏； 郭科； 李海鹏；

【机构】 东南大学附属中大医院神经内科； 中南大学湘雅三医院神经内科；

【摘要】 目的:神经元凋亡在脑缺血再灌注脑组织损伤中占有重要地位。已经证实TNF-α、TNFR Ⅰ表达上调可调节神经元凋亡;但尚未得知在脑缺血再灌注损伤脑组织中,是否有某种内在因子调节TNF-α/TNFR Ⅰ表达,从而调控神经元凋亡。TACE／ADAM17可水解TNF-α与TNFRⅠ,由此推测,在脑缺血再灌注损伤脑组织中TACE／ADAM17过度表达,可参与调控神经元凋亡过程。方法采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型。选用清洁级健康雄性Wistar大鼠161 只,随机分为以下各组,每组8-12只,包括正常对照组、假手术组、缺血3h组、缺血3h再灌注3h、6h、12h、24h、48h、72h组, 缺血3h再灌注β-七叶皂甙钠药物干预后3h、6h、12h、24h、48h、72h组,其中β-七叶皂甙钠剂量为5mg／Kg／次,浓度为1mg／ mL,再灌注同时予以腹腔注射给药,之后给药每1次／24h。采用半定量RT-PCR技术检测不同时间脑缺血半暗带区TACE、 TNF-α与TNFR Ⅰ表达水平,同时运用TUNEL染色检测神经元细胞凋亡。结果:1．凋亡阳性神经元细胞主要分布在缺血半暗带区。正常对照组、假手术组及非缺血侧仅见极少量棕色凋亡阳性神经元细胞;模型组脑缺血半暗带区在再灌注3h凋亡阳性神经元细胞数目达到最高峰(P<0．01);七叶皂甙钠干预治疗后,脑缺血半暗带区凋亡阳性神经元细胞数目均减少。2．在正常对照组大鼠脑组织有TACE、TNFR Ⅰ mRNA表达,而TNF-αmRNA仅有少量表达。模型组在脑缺血半暗带区TACE、 TNFR Ⅰ与TNF-αmRNA均有过度表达;TACE mRNA表达在脑缺血再灌注3h、12-24h达高峰(P<0．01),TNF-αmRNA 表达在脑缺血再灌注12h达高峰(P<0．01),而TNFR Ⅰ mRNA在脑缺血再灌注24-48h明显过度表达(P<0．01);七叶皂甙钠干预治疗后,大鼠脑缺血半暗带区TACE、TNFR Ⅰ与TNF-αmRNA表达均降低(P<0．01)。3．在脑缺血半暗带区TACE、 TNF-α、TNFR Ⅰ基因mRNA表达均与凋亡阳性神经元细胞数目呈正相关,TACE mRNA表达与TNF-α、TNFR Ⅰ基因 mRNA表达也呈正相关。结论:大鼠局灶脑缺血再灌注后,有TACE mRNA过度表达,其表达高峰与凋亡神经元细胞数目表达高峰基本一致;TACE过度表达可能主要促进神经元细胞凋亡。更多还原