银杏叶提取物对帕金森病大鼠黑质细胞自由基、凋亡、超微结构作用研究

【作者】 曹非； 孙圣刚； 乔娴； 陈吉相； 梅元武； 童萼塘； 骆芳；

【机构】 华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科；

【摘要】 目的:本试验旨在通过生化、免疫组织化学、TUNEL、电镜的方法观察银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract, EGb)在大鼠帕金森病形成过程中对大鼠黑质细胞的保护作用,从而论证EGb能够通过多途径防治PD可能性,并首次观察在大鼠PD形成过程中黑质细胞凋亡的动态变化情况。方法:选择健康Wistar雄性大鼠132只随机分为二大组:①灌注固定组(n=72):又分为对照组(n=24)、PD模型制作组(PD组,n=24)、EGb组(n=24)。EGb组大鼠每天上午8点按体重行 EGb混悬液(100mg／kg／d)灌胃×7天,第7天行脑立体定位注射6-OHDA术,并继续行EGb混悬液灌胃,直至观察时点;PD 组大鼠每天上午8点按体重行EGb混悬液溶媒灌胃×7天,第7天行脑立体定位注射6-OHDA术,并继续行EGb混悬液溶媒灌胃,直至观察时点;对照组大鼠每天上午8点行EGb混悬液溶媒灌胃×7天,第7天行脑立体定位注射6-OHDA术,注射除外6-OHDA的6-羟基多巴胺注射液,并继续行EGb混悬液溶媒灌胃,直至观察时点。观察时点为注射6-OHDA后 1d、7d、14d、21d。每组每时点任选1只大鼠用于电镜观察。②自由基测定组(n=60):同样分为对照组(n=20)、PD模型制作组 (PD组,n=20)、EGb组(n=20),每组要求同①。通过6-OHDA脑立体定向注射术建立大鼠帕金森病模型,采用生化、免疫组织化学、TUNEL、电镜的方法观察帕金森病大鼠模型制作后1d、7d、14d、21d黑质细胞自由基(丙二醛、过氧化物歧化酶)、细胞凋亡数、HSP蛋白表达的变化及超微结构的改变,同样观察使用银杏叶提取物(EGb组)治疗对上述指标的影响。结果: 在大鼠帕金森病发病过程中PD组、EGb组大鼠黑质丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)、细胞凋亡数、HSP表达随时间增加而升高,PD组大鼠各指标均高于EGb组(P<0．05),PD组黑质细胞超微结构改变符合典型的凋亡改变。结论:细胞凋亡参与了帕金森病发病,银杏叶能明显减轻大鼠帕金森病发病过程中黑质细胞损伤。更多还原