PDE4D和ALOX5AP的mRNA水平与高血压性脑卒中相关性的动物实验研究

【作者】 盛文利； 许晓伟； 刘琳；

【机构】 中山大学附属第一医院神经科；

【摘要】 目的:脑卒中是多种异质性病症组成的复杂疾病,是由多种基因相互作用以及基因与环境因素共同作用的结果。通过大量临床病历资料的分析及对双胞胎及家族聚集现象的研究也均证实遗传因素对脑卒中的发生具有重要的意义。2003年以来冰岛科学家相继发现两种最新的独立于传统危险因素以外的脑卒中危险因子,编码磷酸二酯酶4D(Phosphodiesterase 4D)的基因PDE4D和编码5-旨肪氧合酶激活蛋白(5-lipoxygenase activating protein)的基因ALOX5AP,其相关单倍型提示脑卒中发生的危险性分别是正常的1．5倍和2倍,然而此后相继有关这两个基因与脑卒中相关性的研究在不同地区和人群中进行得到的结论却不一致,可能是由于种族和地区差异造成的,这也为深入确切得了解两基因与脑卒中的相关性增加了难度。因此迫切需要进行系统的动物实验研究,并对实验动物能更好地模拟人脑卒中发生以及更有利于研究遗传因素提出了很高的要求。本研究旨在通过使用与人类高血压性脑卒中近似的模型大鼠-易卒中型肾血管性高血压大鼠模型(stroke-prone renovascular hypertensive rats,RHRSP),在动物水平初步评价基因PDE4D和ALOX5AP的mRNA水平的变化规律与脑卒中发生的相关性。方法:将体重70-90g的健康雄性SD大鼠按照双肾双夹法制成制成易卒中型肾血管性高血压大鼠,按照血压上升水平的高低将动物模型大鼠分为正常血压组(100-110mmHg)8只;高血压Ⅰ组(140-159mmHg)8只;高血压Ⅱ组(160-179mmHg)8只;高血压Ⅲ组(180-199mmHg)8只;高血压性自发卒中组5只。提取不同组大鼠外周血的总RNA,逆转录成cDNA后进行realtime PCR(荧光实时定量PCR),通过标准曲线法对不同动物组的两基因在mRNA水平上的表达进行相对定量。应用SPSS12．0统计软件对数据进行处理。不同基因的各组间整体比较进行方差分析,两两组间的多重比较采用SNK的方法(检验水准a=0．05),从而分析两基因分别在血压正常组,梯度高血压组,和自发脑卒中组中的表达量是否存在差异。结果:缺血再灌组于缺血60min再灌1h、3h、6h在DWI上均出现明显的大脑中动脉供血区较大范围的缺血高信号区,高信号区与周围正常组织对比明显,并随缺血再灌注时间的延长高信号区范围扩大。而灯盏花素治疗组在相同时间点均能明显减小高信号区的体积,与缺血再灌注组相比较差异极显著(P<0．01)。缺血再灌注组于缺血60min再灌1h、3h、6h NAA／(PCr+Cr)与Lac/(PCr+Cr)比值分别是(0.55±0.23)、 (1．09±0．34);(0．57±0．12)、(0．99±0．37);(0．58±0．13)、(1．16±0．27)。灯盏花素治疗组在相同时间点能有效减少脑缺血后Lac/ (PCr+Cr)比值的上升与和NAA/(PCr+Cr)比值的下降,比值分别为(1．09±0．18)、(0.09±0．07);(0．81±0．23)、(0．20±0．11);(0．79± 0．20)、(0．19±0．12)。与缺血再灌组比较有显著差异(P<0．01)。结论:PDE4D在卒中组的表达量均大于正常组与高血压组,高血压Ⅰ组的表达量高于正常组,高血压Ⅱ、Ⅲ组的表达量与正常组无差异。ALOX5AP在卒中组的表达量均大于正常组与高血压组,高血压组与正常组的表达量无差异。动物实验表明PDE4D与和ALOX5AP的过表达均与高血压性脑卒中的发生相关。这为后续深入探索PDE4D和ALOX5AP与脑卒中相关性的具体机制提供平台,并为研究脑卒中的防治提供了新的靶点。更多还原