阿魏酸钠抑制高糖诱导的原代肾小球系膜细胞增生

【作者】 张国忠； 罗华； 石明隽； 桂华珍； 郭兵；

【机构】 贵阳医学院病理生理教研室；

【摘要】 目的:研究阿魏酸钠(SF)对高糖培养原代肾小球系膜细胞生长的作用及探讨其作用机制。方法:原代培养肾小球系膜细胞,待其80％融合时,转入12孔板,行无血清培养 24小时,使细胞生长同步。分为正常组(5．5mmol/L D-葡萄糖);甘露醇组(5．5mmol／L D -葡萄糖+24．5mmol／L甘露醇);高糖组(30 mmol/LD-葡萄糖):阿魏酸钠组(SF60,120, 240 mg／L+30 mmol／LD-葡萄糖)。分别于培养后24h、48h收集细胞。用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期及周期素D1(Cyclin D1)和PAI-1的表达;免疫组化检测p5 3和p38MAPK蛋白,图象分析系统分析其表达水平。结果: (1)．高糖促进肾小球系膜细胞增殖,与正常组比,24h增殖78．7％,48h增殖71．4％; S期细胞明显增多(P<0．01=,G0 ／G1期细胞明显减少(P<0．01=;CyclinD1、PAI-1、p38MAPK蛋白的表达上调,高糖培养4 8h分别是正常组的3．4、3和2．8倍(P<0．01=;高糖作用24h p38MAPK在细胞核内有表达, 48h则十分显著;而p53的表达减少(P<0．01=,细胞核内未见表达。(2)．阿魏酸钠呈剂量依赖性抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖(P<0．05和P<0．01=;抑制细胞周期,使G 0／G1期细胞数显著增加(P<0．01=,S期细胞明显减少(P<0．01=;下调CyclinD1、PAI-1、 p38MAPK蛋白的表达(P<0．01=,p38MAPK在细胞浆和胞核内阳性信号强度明显低于同时间的高糖组:p53表达明显增强(P<0．01=,在胞浆和胞核内均有阳性表达。 (3)．甘露醇组与正常组比:肾小球系膜细胞轻度增殖,但差异无显著性;细胞周期也无明显变化;Cyc1 in D1、p53的表达无显著改变;PAI-1、p38MAPK蛋白表达升高,2个时间组均有显著差异(P <0．01和P<0．05=,但其升高水平明显低于高糖组,p53和p38MAPK主要表达在胞浆内靠近核周。(4)．p38MAPK蛋白表达与CyclinD1、PAI-1表达呈正相关,与p53表达呈负相关; CyclinD1与PAI-1表达呈正相关,与p53表达呈负相关。结论:(1)．高糖诱导肾小球系膜细胞增殖,促进PAI-1、CyclinD1、p38MAPK表达,抑制p53的生成。(2)．高糖刺激可能通过p38MAPK信号途径上调CyclinD1表达、抑制p53的生成,加速细胞周期,促进肾小球系膜细胞增殖,增加PAI-1的合成。p38MAPK通路可能是调控细胞周期和PAI-1生成的交汇点。(3)．阿魏酸钠可能通过下调p38MAPK的表达而对抗高糖诱导肾小球系膜细胞的过度增殖和PAI-1表达。更多还原